[发明专利]小RNA组成的指纹图谱在人的癌性胸腔积液诊断和治疗中的应用

说明书

本发明涉及小RNA组成的指纹图谱在人的癌性胸腔积液诊断和治疗中的应用。通过对近两千个miRNA进行筛选，发现一系列的特异性的miRNA组合，可以非常有效地区分癌性胸腔积液和良性胸腔积液。

技术领域

本发明涉及生物医学、生物工程和检测技术领域，具体地，涉及小RNA组成的指纹图谱在人的癌性胸腔积液诊断和治疗中的应用。

背景技术

胸腔积液又名为胸水，是临床常见的一种胸部病变，多种疾病如结核性胸膜炎、心衰、低蛋白血症和肿瘤等均可导致胸水的产生(Light RW.；2002)。虽然临床常见，但是病因却复杂多变，而病因诊断又决定了治疗方法。而根据相关数据显示，在成人的胸腔积液中有38％-52％左右为恶性胸腔积液(Konstantin A.Dimitriadis；2001)。恶性胸腔积液(Malignant pleural effusion,MPE)是指原发于胸膜的恶性肿瘤或其他部位的恶性肿瘤转移至胸膜引起的胸腔积液。据统计，至2014年，美国每年MPE的发病人数超过15万人。几乎所有的恶性肿瘤均可出现MPE。其中肺癌是最常见的病因，约占MPE的1/3，乳腺癌次之，淋巴瘤也是导致出现MPE的重要原因，近几年，卵巢癌和胃肠道癌出现MPE的患者也不少见，约有5％-10％的MPE患者找不到原发肿瘤病灶(徐亚军等人；2011)。出现MPE表明肿瘤扩散或已进展至晚期，患者预期寿命将显著缩短。MPE从确诊开始计算，中位生存期为3-12个月，这与原发肿瘤类型和分期有关。已有证据显示，肺癌所致MPE患者生存期最短，卵巢癌患者最长，无法找到原发灶的MPE患者生存期介于上述两者之间。

良性胸腔积液与恶性胸腔积液两者的治疗和预后截然不同，因而胸水的良恶性鉴别诊断十分重要。例如结核性胸水与恶性胸水均可表现为血性，凭外观与常规检查很难区分，但二者的治疗和预后却截然不同。胸腔积液的鉴别诊断方式有很多，例如依靠临床症状、胸腔积液的常规检查和生化检查，来区分渗出液和漏出液，并结合影像学诊断及临床医生的判断等来确定胸水的性质。然而，这些方法特异性比较低；而影像学方法对胸腔积液性质的定性诊断尚存在不足，仅能根据肺部、胸膜、纵隔及心脏疾病间接判断胸腔积液的性质。对于MPE的诊断，目前依赖于胸腔穿刺获取胸腔积液进行细胞学分析。然而，胸腔积液的细胞学分析对于诊断MPE的灵敏度仅有50-70％(Ong K C et al；2000)。此外，在胸水中没有发现癌细胞的病例，还可以进行胸腔镜胸膜活检，明确病理。但该方法是侵入性手术，且存在感染，出血和慢性疼痛等并发症的风险^[7]。对于身体状况差且伴有其他合并症的患者，难以开展。

由此看来，胸腔积液的良恶性鉴别依然是临床上面临的一大难题。尤其对于那些肿瘤合并心衰，肿瘤继发的阻塞性肺炎或肺不张,肿瘤侵犯淋巴管或纵隔淋巴结引起淋巴回流障碍等产生的胸水更加难以区分良恶性。另外，胸腔积液的细胞成分相对比较复杂，其中混杂有间皮细胞,巨核细胞,淋巴细胞,中性粒细胞或恶性肿瘤细胞等。创伤、炎症和肿瘤等都能导致间皮细胞的过度增生，而且有时过度增生细胞的程度介于良恶性之间，因而细胞学上很难将良性疾病、间皮瘤和转移性腺癌区分开来。

因此，本领域迫切需要探索其他更加敏感的诊断方法(如深入挖掘癌性胸腔积液发病相关的miRNAs)来辅助鉴别诊断胸腔积液，这对于指导癌性胸腔积液的诊疗和评估预后具有重要的指导意义。

发明内容

本发明的目的在于提供有效的小RNA指纹图谱，用于癌性恶性胸腔积液(较佳地，肺癌型恶性胸腔积液)的诊断、肿瘤分级和预后评价；和/或区分癌性胸腔积液和良性胸腔积液(较佳地，区分肺癌型恶性胸腔积液和良性胸腔积液)。

在本发明中，第一方面提供了一种分离的miRNA，所述的miRNA为：

(ⅰ)序列如SEQ ID NO:n所示的miRNA，其中n为选自1-32的正整数；

(ⅱ)与SEQ ID NO:n所示序列互补的miRNA；

(ⅲ)序列如SEQ ID NO:1-32所示的miRNA中的两种或两种以上的组合；或