[发明专利]一种白术内酯提取物及在CIK细胞冻存保护方面的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种白术内酯提取物及在CIK细胞冻存保护方面的应用。

背景技术

白术内酯类成分为白术的主要有效成分，目前已发现如下结构的白术内酯：

申请人发现，白术内酯Ⅱ和白术内酯V对冻存的CIK细胞具有保护作用，已提交相关专利申请(申请号2017109786579和2017109955153)。

但是，制备白术内酯Ⅱ或白术内酯V纯品的成本较高。如果能够制备一种以白术内酯Ⅱ和白术内酯V为主要成分的提取物，就可以以该提取物替代白术内酯Ⅱ或白术内酯V纯品用作CIK细胞冻存保护剂，降低生产成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种白术内酯提取物及在CIK细胞冻存保护方面的应用。

实现本发明上述目的技术方案如下：

一种白术内酯提取物，以白术为原料提取富集得到，该提取物中白术内酯Ⅱ和白术内酯V的含量之和在90％以上，优选95％以上。

优选地，提取富集步骤包括：

步骤S1，加酸腐化：白术粉碎，边翻动边喷稀盐酸，待药粉湿润后于50-60℃堆置过夜；

步骤S2，乙醇提取：用体积百分浓度为60-90％的乙醇溶液提取上述腐化的药粉，收集提取液，回收提取液中的乙醇，得浓缩液；

步骤S3，大孔树脂富集：将上述浓缩液加水稀释，调节pH值至5.4-5.6，上样于XDA-6大孔吸附树脂，依次用体积百分浓度为25％、45％、65％、85％的乙醇溶液各洗脱6-10个柱体积，收集85％乙醇洗脱液，浓缩干燥，低温冻存备用。

优选地，所述稀盐酸浓度为0.2-0.4mol/L。

优选地，提取用的乙醇浓度优选75％。

优选地，以冷浸或热回流或渗漉法提取。

优选地，低温冻存指-80℃低温冻存。

上述白术内酯提取物HPLC分析方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以含有三氟乙酸的有机溶剂水溶液为流动相；检测波长为276nm；流速为1.0mL/min；柱温为35±2℃。

优选地，所述有机溶剂水溶液为乙腈体积百分浓度34-38％的乙腈水溶液，含有体积百分浓度2.5-4.5％的三氟乙酸。

优选地，所述有机溶剂水溶液为甲醇体积百分浓度47-51％的甲醇水溶液，含有体积百分浓度2-4％的三氟乙酸。

XDA-6大孔吸附树脂在制备白术内酯提取物方面的应用，所述白术内酯提取物以白术为原料提取富集得到，白术内酯Ⅱ和白术内酯V的含量之和在90％以上，优选95％以上。

本发明的突出优点：

本发明提供的白术内酯提取物富含白术内酯Ⅱ和白术内酯V，二者含量之和在90％以上，既可以作为制备白术内酯Ⅱ或白术内酯V单体的中间体原料，又可以直接用作CIK细胞冻存保护剂，且该提取物制备方法简单，提取后仅需过一次大孔吸附树脂即可，易于产业化。

附图说明

图1为实施例1-3制备的提取物的HPLC分析色谱图。

具体实施方式

下面就结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，由于篇幅原因，实验过程的描述无法做到非常详细，凡是实验中未详细描述的部分均为本领域技术人员熟知的常规操作。

实施例1提取物的制备

一、实验材料

XDA-6大孔吸附树脂购于郑州勤实科技有限公司。

二、实验方法

一种白术内酯提取物的制备方法，包括如下步骤：

步骤S1，加酸腐化：白术粉碎，边翻动边喷稀盐酸，待药粉湿润后于55℃堆置过夜；

步骤S2，乙醇提取：用体积百分浓度为75％的乙醇溶液提取上述腐化的药粉，收集提取液，回收提取液中的乙醇，得浓缩液；

步骤S3，大孔树脂富集：将上述浓缩液加水稀释，调节pH值至5.5，上样于XDA-6大孔吸附树脂，依次用体积百分浓度为25％、45％、65％、85％的乙醇溶液各洗脱8个柱体积，收集85％乙醇洗脱液，浓缩干燥，-80℃低温冻存备用。

所述稀盐酸浓度为0.3mol/L，以冷浸法提取。

实施例2提取物的制备

一、实验材料

XDA-6大孔吸附树脂购于郑州勤实科技有限公司。

二、实验方法

一种白术内酯提取物的制备方法，包括如下步骤：