[发明专利]一种粪菌移植治疗中标准粪菌冻干粉制备工艺

权利要求书

1.一种粪便移植治疗中标准粪菌冻干粉制备工艺，其特征在于包括以下步骤：

(1)标准粪菌液制备；

(2)冻干保护剂配制；

(3)三步法冷冻，真空干燥；

其中,冻干保护剂的配制为在无菌生理盐水中分别加入10-20％海藻糖，5-10％甘油和0.02-0.05％维生素C混匀，滤过除菌。

2.根据权利要求1所述的粪便移植治疗中标准粪菌冻干粉制备工艺，其特征在于所述步骤(1)的具体操作为：无菌采集供体粪便，匀质处理后，经纱布过滤后离心，弃掉上清液得到粪菌泥浆沉淀物。

3.根据权利要求1所述的粪便移植治疗中标准粪菌冻干粉制备工艺，其特征在于所述步骤(3)的具体操作为：将冻干保护剂加入粪菌泥浆中，涡旋混匀，取1mL菌液进行粪菌培养计数，剩余液体置于冻干机内，设定冻干程序：由室温快速降温至4℃，4℃至-40℃每分钟降低1℃，-40℃到-60℃每分钟降低5℃，当温度下降到-60℃以下时，将冻结好的样品迅速放入冻干机钟罩内，启动真空泵抽气直到样品干燥，冻干的样品置于-80℃冰箱，保存三个月。

4.根据权利要求3所述的粪便移植治疗中标准粪菌冻干粉制备工艺，其特征在于所述粪菌培养计数选取对环境条件比较敏感且为益生菌的双歧杆菌作为检测指标。

5.根据权利要求4所述的粪便移植治疗中标准粪菌冻干粉制备工艺，其特征在于所述粪菌培养计数包括以下步骤：BBL培养平板制备，涂板，培养计数。

6.根据权利要求4所述的粪便移植治疗中标准粪菌冻干粉制备工艺，其特征在于所述BBL培养平板制备的具体操作为：BBL培养基70g，加入1ml吐温80，加热溶于1000ml蒸馏水中，115℃灭菌20min；冷却至50℃，倾倒至直径为90mm的无菌培养皿中，每皿10mL-15mL，置于无菌条件下冷却凝固。

7.根据权利要求4所述的粪便移植治疗中标准粪菌冻干粉制备工艺，其特征在于所述涂板的具体操作为：将取得的样品分别加至9mL体积的无菌生理盐水中，倍比稀释混匀，取10⁷和10⁸两个稀释度涂板。

8.根据权利要求4所述的粪便移植治疗中标准粪菌冻干粉制备工艺，其特征在于所述培养计数的具体操作为：将培养板置于厌氧袋中，放于培养箱中35℃-37℃厌氧培养72h后，进行菌落计数。