[发明专利]获得甘蔗健康种苗的方法

说明书

技术领域

本发明属于甘蔗健康种苗高效繁育技术领域，尤其涉及一种获得甘蔗健康种苗的方法。

背景技术

甘蔗是我国主要的糖料作物，甘蔗产量和含糖量是制约糖业发展的关键因素。甘蔗在种植过程中常受到高粱花叶病毒、甘蔗花叶病毒、甘蔗黄叶病毒、甘蔗杆状病毒、宿根矮化病、甘蔗黑穗病和梢腐病等病害的危害，造成甘蔗产量和含糖量下降。

在生产上通常是以蔗茎作为种子进行无性繁殖，经多代无性繁殖后种茎携带各种病原物的比例大幅提高，导致甘蔗种茎种性退化严重，甘蔗产量和质量逐渐下降，给甘蔗产业造成巨大损失。此外，携带病原物的甘蔗也会作为毒源传染其他健康甘蔗植株，危害进一步扩大。为此，设法获得健康甘蔗种苗并对健康甘蔗种苗进行扩繁，以生产符合行业标准要求的合格甘蔗种茎是蔗糖产业健康发展迫切所需。因此，探寻简单、高效、低成本的甘蔗健康种苗繁育方法已成为一个研究热点。

目前茎尖脱毒是培育甘蔗健康种苗的主要方法，该方法以含病毒量相对低的甘蔗茎尖作为外植体进行组培快繁，然而这并不能彻底脱除甘蔗内的病毒，因此获得健康种苗的概率不高。而且，该方法有一定的盲目性，且组培苗生产数量庞大，检测成本过高，生产上很难实现大量样本的检测。另一种培育甘蔗健康种苗的方法是种茎温水处理法，该方法将甘蔗种茎放置在50℃左右的温水中浸泡一定时间，达到去除或钝化病原物的目的，然而该法需要特定设备，耗时、费力、增加生产成本，并且还不能彻底去除病毒。此外，目前甘蔗健康种苗的扩繁多在没有妥善保护措施的种苗繁育大田中进行。因此获得的各级种苗无法避免受病毒害的再次感染，也无法保证蔗种的健康性；并且种苗的优良种性退化严重，难以保障甘蔗健康种苗的可持续性产出。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种技术简单、成本低廉、健康率高且可持续产出的获得甘蔗健康种苗的方法，以期从源头上保证所繁育的甘蔗种苗保持健康状态。

为解决上述问题，本发明采用以下技术方案：

获得甘蔗健康种苗的方法，对甘蔗植株分别进行SCBV、Lxx、SrMV、SCMV和ScYLV的PCR检测，将检测健康的甘蔗植株移种到具有隔离保护措施的网室大棚内，作为健康甘蔗种源以及为组培扩繁提供外植体材料。

PCR检测按以下操作进行：先提取甘蔗植株叶片的DNA，检测SCBV和Lxx，再对不带SCBV和Lxx的样品提取RNA，检测SrMV、SCMV、ScYLV，以上病毒害均不带者即为健康的甘蔗植株。

PCR检测各病毒害的PCR引物分别为：

SrMV：F：ACAGCAGAWGCAACRGCACAAGC，R：CTCWCCGACATTCCCATCCAAGCC；

SCMV：F：AATCTTGAGGAATGCGGAAAAC，R：ATCGATAGGCCCACAAATGAGTCT；

ScYLV：F：AATCAGTGCACACATCCGAG，R：GGAGCGTCGCCTACCTATT；

SCBV：F：GATGGATGACTGTTTCAGAGGC，R：GAGGGATGGTAAGATTTGGC：

Lxx：1：CCGAAGTGAGCAGATTGACC，2：ACCCTGTGTTGTTTTCAACG。

上述获得甘蔗健康种苗的方法，包括以下步骤：

A、健康甘蔗植株的筛选；

B、健康甘蔗植株的隔离保存；

C、健康外植体的培育；

D、健康种苗的扩繁。

步骤A按以下操作进行：从甘蔗种植大田中采集长势良好、外观没有病害症状的甘蔗植株叶片，对这些甘蔗植株进行SrMV、SCMV、ScYLV、SCBV和Lxx病毒害检测，先提取这些叶片的DNA，检测SCBV和Lxx；再对不带SCBV和Lxx样品的样品提取RNA，检测SrMV、SCMV、ScYLV，以上病毒害均不带者即为健康甘蔗。

步骤B按以下操作进行：将经检测的健康甘蔗植株移种到具有隔离保护措施的网室大棚内。

步骤C按以下操作进行：

①外植体处理：去除蔗芽的外层老叶，经75％酒精消毒后放入灭菌的超净台，取芽尖2-3mm的生长点接种；或者用甘蔗顶端去除老叶的分生组织作为外植体，需先用75％酒精消毒15min，再经升汞消毒30min，蒸馏水翻转震荡洗涤3-4遍，每遍洗涤5min，将消毒后的分生组织放入灭菌的超净台，再去除1-2层老叶，将其切成1-2mm厚的薄片接种；