[发明专利]一种超敏C反应蛋白的检测方法

权利要求书

1.一种超敏C反应蛋白的检测方法，包括以下步骤：

1)通过样本稀释液将标准品制成标准测试样本，得到其发光信号值，然后以标准品的浓度为横坐标，信号值为纵坐标绘制成标准曲线；

2)制备链霉亲和素磁珠、标记物缓冲液、生物素标记的hs-CRP抗体和吖啶酯标记的hs-CRP抗体，所述标记物缓冲液为2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液；

3)再取适量的待测血清样品加入全自动发光免疫分析仪的反应杯中，并加入适量的步骤2)制备的生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体、链霉亲和素磁珠温浴，测试发光值，得到待测血清样品的信号值，同时将适量的标准测试样本加入反应杯中作为对照进行测试；优选地，于37℃温浴3-9min，优选5-6min；

4)然后将待测样品的信号值与步骤1)的标准曲线比对，得出待测血清样品中的超敏C反应蛋白的浓度，即得。

2.根据权利要求1所述的超敏C反应蛋白的检测方法，其特征在于，在步骤1)中，所述2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液中添加有活性剂，所述活性剂为月桂醇聚氧乙烯醚。

3.根据权利要求2所述的超敏C反应蛋白的检测方法，其特征在于，所述2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液的pH为6.0，浓度为0.05Mol/L。

4.根据权利要求3所述的超敏C反应蛋白的检测方法，其特征在于，所述2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液含有以下各组分：0.5体积％牛血清白蛋白(BSA)，1％蔗糖，0.1体积％吐温-20(Tween-20)、0.1体积％月桂醇聚氧乙烯醚(Brig35),0.1体积％生物防腐剂(ProClin300)。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的超敏C反应蛋白的检测方法，其特征在于，在步骤2)中，所述链霉亲和素磁珠的粒径为0.5～3.0μm，优选为1.0μm。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的超敏C反应蛋白的检测方法，其特征在于，在步骤2)中，所述生物素标记的hs-CRP抗体的浓度为0.1～0.5mg/L，优选0.3mg/L。

7.根据权利要求6所述的超敏C反应蛋白的检测方法，其特征在于，所述生物素标记的hs-CRP抗体通过包括以下步骤的方法制成：

先将hs-CRP抗体用磷酸盐缓冲液透析，再将已活化的生物素加入纯水溶解，得到生物素溶液；然后将透析后的hs-CRP抗体与生物素溶液混合后得到混合液，将混合液于室温放置后，再用磷酸盐缓冲液透析，得到透析后的混合液；然后用标记物缓冲液将透析后的混合液稀释备用；

优选地，所述已活化的生物素与hs-CRP抗体以1:5～1:20的质量比混合，优选以1:10的质量比混合。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的超敏C反应蛋白的检测方法，其特征在于，在步骤2)中，所述吖啶酯标记的hs-CRP抗体的浓度为0.05～0.5mg/L，优选0.1mg/L。

9.根据权利要求8所述的超敏C反应蛋白的检测方法，其特征在于，所述吖啶酯标记的hs-CRP抗体通过包括以下步骤的方法制成：

先将hs-CRP抗体用磷酸盐缓冲液透析，再将已活化的吖啶酯加入纯水溶解，得到吖啶酯溶液；然后将透析后的hs-CRP抗体与吖啶酯溶液混合后，将混合液于室温放置后，再用磷酸盐缓冲液透析；然后用标记物缓冲液将透析后的混合液稀释备用；

优选地，所述已活化的吖啶酯与hs-CRP抗体以1:10～1:50的质量比混合，优选以1:20的质量比混合。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的超敏C反应蛋白的检测方法，其特征在于，在步骤2)中，所述链霉亲和素磁珠的浓度为0.3～0.9g/L，优选0.45g/L。