[发明专利]一种基于光学显微镜的抗坏血酸浓度在线传感分析方法以及辅助显色剂

权利要求书

1.一种基于光学显微镜的抗坏血酸浓度在线传感分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将显色剂与空白对照液持续等速同步通入固定在光学显微镜下的透明毛细管中，用光学显微镜对所述透明毛细管连续拍照，用图像分析软件将连续拍照所得的各张照片的光强信号分别转化为数字信号，取平均值，作为光强数值I₀；

(2)将n份不同浓度的抗坏血酸标准品分别与所述显色剂持续等速同步通入所述透明毛细管中，采用与步骤(1)相同的方法进行拍照、信号转化后，得到n个光强数值I₁，I₂……I_n-1，I_n，分别求得与I₀的光强差值I₁-I₀，I₂-I₀……I_n-1-I₀，I_n-I₀；

(3)以所述n份标准品的浓度为横坐标、相应的光强差值为纵坐标，在平面直角坐标系中做图，得到回归曲线；

(4)将待测抗坏血酸样品与所述显色剂持续等速同步通入所述透明毛细管中，采用与步骤(1)相同的方法进行拍照、信号转化后，得到光强数值I_x，求得与I₀的光强差值I_x-I₀；

(5)将所述光强差值I_x-I₀代入步骤(3)所得回归曲线中，求得浓度，即为待测抗坏血酸样品的浓度；

所述显色剂为液态显色剂，由包括羟基氧化钴和3,3',5,5'-四甲基联苯胺的原料混合而成。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述显色剂中，羟基氧化钴和3,3',5,5'-四甲基联苯胺的摩尔比为(1～1)：(3～1)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述显色剂中还含有缓冲剂和螯合剂。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述显色剂中还含有柠檬酸和乙二胺四乙酸。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述显色剂由浓度35～45μg/mL的羟基氧化钴混悬液与浓度1.5～2.5mmol/L的3,3',5,5'-四甲基联苯胺水溶液按体积比(1～2)：(1～2)混合而成；所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺水溶液中含有浓度为1～10μmol/L的柠檬酸和浓度为0.4～0.6mmol/L的乙二胺四乙酸。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述显色剂由浓度40μg/mL的羟基氧化钴混悬液与浓度2.0mmol/L的3,3',5,5'-四甲基联苯胺水溶液按体积比1:1混合而成；所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺水溶液中含有浓度为5μmol/L的柠檬酸和浓度为0.5mmol/L的乙二胺四乙酸。

7.根据权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于，所述标准品的份数n为3～10，浓度在1～50μM的范围内。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述标准品的份数为5，浓度分别为1μM、5μM、10μM、20μM以及50μM。

9.根据权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于，所述光学显微镜的拍摄模式为物镜40X、手动放大1.6X，黑白模式。

10.根据权利要求1～6任意一项所述的方法，其特征在于，所述透明毛细管的内径为200～300μm。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述透明毛细管的内径为240～260μm。