[发明专利]一种小型鱼类个体全身皮质醇含量测定的方法

说明书

本发明属于鱼类生化检测分析领域。涉及一种小型鱼类个体全身皮质醇含量测定的方法。步骤包括：1)将冻干的鱼类样品分别研磨均匀，取适量样品分别用体积比为2：1的氯仿‑甲醇溶液浸泡至少24h；2)向体积比为2：1的氯仿‑甲醇溶液浸泡的样品中加入等量体积比为2：1的氯仿甲醇溶液，摇匀，抽滤，得到黄色透明溶液，加少量蒸馏水在梨形漏斗中使之分成界限清晰的两层；3)用球形瓶取下层液体，用旋转蒸发仪蒸干；4)用体积比为1：1的氯仿‑甲醇溶液溶解球形瓶中蒸干后固体，转至具刻度的玻璃试管中，氮气吹干，得到每条鱼全部含皮质醇的体脂肪；5)以吐温‑80溶液溶解所得的体脂肪，用于皮质醇含量的测定。

技术领域

本发明属于鱼类生化检测分析技术领域，具体涉及一种小型鱼类全身皮质醇含量测定的方法。本发明的方法可用于河流生态健康环境的评价。

背景技术

皮质醇作为糖皮质激素中的主要成分，通常用来反映生物体的应激水平。然而目前皮质醇测定的方法都仅限于测定生物体血液中的皮质醇含量，具有一定的局限性。对于个体体长较小(约3cm～8cm)，血量较少的鱼类，想要从个体水平上反应其应激性，目前还没有一套完善的方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种用于一种小型鱼类个体全身皮质醇含量测定的方法，以解决现有技术的不足。

本发明结合Folch脂肪提取的方法和大型鱼类血液中皮质醇含量测定的方法，并在此基础上加以改善，提供了一种小型鱼类全身皮质醇含量测定的方法。

本发明的技术方案如下：

一种小型鱼类个体全身皮质醇含量测定的方法，其步骤包括：

(1)将冻干的鱼类样品分别研磨均匀，从研磨好的每个鱼类样品中分别取适量，用体积比为2：1的氯仿-甲醇溶液浸泡样品至少24h；

(2)向体积比为2：1的氯仿-甲醇溶液浸泡的样品中再加入等量的体积比为2：1氯仿-甲醇溶液，摇匀，抽滤，直到得到黄色透明溶液，将其转移至梨形漏斗，再向漏斗中加入少量蒸馏水，盖好摇匀后静置直至漏斗内液体分成明显的上下两层(见图1)；

(3)用球形瓶取下层液体，并用旋转蒸发仪蒸干；

(4)用体积比为1：1的氯仿-甲醇溶液溶解球形瓶中蒸干后的固体，并转移至具刻度的玻璃试管中，用氮气吹干，得到每条鱼全部的含皮质醇的体脂肪；

(5)用包含有10％的乙醇的10％浓度的吐温80溶液溶解从小型鱼类个体中提取出来的体脂肪(见图2)，用于皮质醇含量的测定。

本发明的有益效果：

本发明获得一个可用于一种小型鱼类个体全身(包括肌肉，血液等组织)皮质醇含量测定的方法鱼类全身的皮质醇含量的方法，由此反映小型鱼类的应激水平。

附图说明

图1：拉氏鱥样品脂肪溶液分层图。

图2：利用吐温-80溶解不同拉氏鱥脂肪样品的对比图。

具体实施方式

以下结合实例对本发明小型鱼类全身皮质醇含量的测定的具体操作方法进行进一步说明。

实施例1小型鱼类全身皮质醇含量测定(以拉氏鱥测定为例)

1、鱼类样品的采集

将拉氏鱥从水中捞起后迅速投入液氮中，使其立即死亡，从而避免捕捞行为对拉氏鱥体内皮质醇含量产生的影响。

2、脂质提取前的准备工作

(1)将拉氏鱥鲜鱼样品在冷冻干燥前最好放在-80℃冰箱保存，以免皮质醇被分解。