[发明专利]一种粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法

权利要求书

1.一种粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)按照下列组分含量配制试剂R1：

试剂R1：

其溶剂为纯化水；

①按照上述试剂R1的组分含量，配制MES缓冲液并调节pH；

②按照上述试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN₃、BSA、EDTA、Tween-20、PEG-8000溶于MES缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，制得R1缓冲液；

③按照上述试剂R1的组分含量，将生物素偶联的抗体共价物溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，即得试剂R1；

(2)按照下列组分含量配制试剂R2：

试剂R2：

其溶剂为纯化水；

①按照上述试剂R2的组分含量，配制MES缓冲液并调节pH；

②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN₃、BSA、甘油溶于MES缓冲液中，搅拌均匀，即得R2缓冲液；

③制备乳胶亲和素共价物：

a.取粒径为120nm的胶乳微球于MES缓冲液中，加入EDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀0.5-1.5h，离心去上清；再加入NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀0.5-1.5h，离心去上清；

b.将剩余物质分散于MES缓冲液中，加入亲和素，37℃下反应3-5h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2-4次；最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入酪蛋白；

c.2-8℃封存45-50h，得最终所需的乳胶亲和素共价物；

④用R2缓冲液来溶解得到的乳胶亲和素共价物，超声分散，最终制得试剂R2。

2.根据权利要求1所述的粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，试剂R1的MES缓冲液的pH为6.1。

3.根据权利要求1所述的粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，试剂R2的MES缓冲液的pH为7.5。

4.根据权利要求1所述的粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备乳胶亲和素共价物的步骤a中，采用的MES缓冲液为100mM MES缓冲液。

5.根据权利要求1所述的粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备乳胶亲和素共价物的步骤a中，采用的EDAC溶液为50g/L的EDAC溶液。

6.根据权利要求1所述的粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备乳胶亲和素共价物的步骤a中，采用的NHS溶液为50g/L的NHS溶液。

7.根据权利要求1所述的粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备乳胶亲和素共价物的步骤b中，加入的酪蛋白为30g/L的酪蛋白。