[发明专利]一种用于显微注射的蚊卵处理方法

说明书

技术领域

本发明属于病虫防害领域，具体地是涉及一种用于显微注射的蚊卵处理方法。

背景技术

现有的收集蚊卵的方法：用吸蚊器收集6-10只已吸足血液的雌蚊，并将其放入到带有湿润棉花和滤纸的离心管中，放到黑暗的养蚊环境中产卵60-90min。

现有的蚊卵处理方法是：收集上述蚊卵，在解剖镜下用毛笔将注射蚊卵排序，尽量挑选出灰白色的蚊卵，所有蚊卵的尾部必须朝向相同，分别排列注射供体和受体；排列完成后将带有排列好蚊卵的厚滤纸反转贴在有双面胶的玻片上，并轻轻按压，使蚊卵粘在双面胶上。将蚊卵在室温下干燥1min左右。

现有的注射后蚊卵处理方法：显微注射完毕，用毛笔轻轻挑取注射过的受体蚊卵，将它们放置在底部垫有湿润棉花的滤纸中，放入27℃温度、80％相对湿度的环境中。7d后，取出带有蚊卵的滤纸，放入滴有孵化液的纯水中。定时观察，发现有幼虫孵化，立即将幼虫挑出放入加有少量食物的纯水中。

采用上述方法处理蚊卵，不同环境不同温湿度，很容易造成蚊卵处理不当，失水过少或过多，按压力度过小或过大。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于显微注射的蚊卵处理方法，通过该方法，蚊卵的孵化率以及感染率都得以较大程度的提高。

一种用于显微注射的蚊卵处理方法，包括以下步骤，

(1)收集蚊卵；

(2)保持注射环境室温为20±1℃；先准备好粘着有双面胶的玻片，将收集到的新鲜蚊卵按照头尾一致顺序排列在厚滤纸上，翻转粘着双面胶的玻片，将排列好的蚊卵转移到双面胶上，用镊子的背部轻轻滑过玻片，从而使蚊卵能够粘着在双面胶上，将蚊卵放置在解剖镜灯光下，干燥30±2s，随后立即用水饱和的油覆盖蚊卵，防止蚊卵进一步干燥失水；

(3)进行显微注射，完毕，挑去供体蚊卵以及个别没有进行注射的受体蚊卵，将承载所述双面胶的玻片置于27±1℃温度、80％相对湿度的环境下1±0.1h；

(4)用毛笔轻轻挑取蚊卵，并将它们放置在底部垫有湿润棉花的滤纸中，移回27±1℃温度、80±1％相对湿度的环境中；

(5)注射的蚊卵放置7±1d后，小心取出盛有蚊卵的滤纸，有蚊卵的一面向下，放在一个孵化液：纯水1:9-11的孵化杯里进行孵化，小心用擦镜纸覆盖飘在水面上的蚊卵，定时观察孵化杯，发现有幼虫孵化，立即将幼虫挑出放入加有少量食物的清水中。

优选地，步骤1中：将15±1只腹部明显膨大的产卵期雌蚊，在黑暗养蚊环境下产卵45-60min，收集到蚊卵。

优选地，步骤5中孵化时间为2-3周。

优选地，步骤2中用镊子的背部轻轻滑过承载双面胶的玻片，从而使蚊卵能够顺利粘着在双面胶上。

优选地，所述孵化液与纯水的比例为1:10。

本发明对蚊卵的按压力度和干燥程度进行了明确的标识，有效的稳定了蚊卵状态，对后续显微注射的成功提供了很大的可能性。

显微注射后的蚊卵特别脆弱，本发明先将其置于适宜环境下恢复1h，使其伤口尽量复原；蚊卵孵化时精确孵化液配比，保持厌氧孵化环境；蚊卵经显微注射胞浆内容物有改变，致使其孵化可能要比普通蚊卵长数倍，故后续需要跟进观察孵化情况。

本发明通过一系列的优化，注射后蚊卵孵化率由现有的2％-8％提高到10％-50％，感染率由现有的30％-50％提高到50％-80％。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

实施例1：

本实施例所述用于显微注射的蚊卵处理方法，包括以下步骤，

(1)收集15只腹部明显膨大的产卵期雌蚊，在黑暗养蚊环境下产卵45-60min，收集到蚊卵，保证了蚊卵的新鲜度和同步性；