[发明专利]一类潜在的绿色的有效防治南方根结线虫的马兜铃酸及其衍生物类化合物的分离筛选方法

说明书

本发明涉及一类潜在的绿色有效防治南方根结线虫的马兜铃酸及其衍生物类化合物的分离筛选方法，主要包括以下步骤：将马兜铃属植物枝干剪成小段、烘干、粉碎、甲醇提取、最后经石油醚、氯仿萃取，浓缩，取石油醚和氯仿浸膏分别进行洗脱，采用反复柱层析、沉淀和重结晶的方法进行分离纯化，针对分离获得的化合物进行活性筛选，得到3种具有杀线虫活性的化合物。采用本发明方法工艺流程较为简单，获得的三种杀线虫活性化合物作为植物次生代谢产物，是一类潜在的绿色的杀线虫(尤其南方根结线虫)的化合物，通过活性评估对比，可以将其作为先导化合物，为进一步的结构修饰研究奠定基础。

技术领域

本发明涉及化合物提取分离技术领域，尤其涉及一类潜在的绿色的有效防治南方根结线虫的马兜铃酸及其衍生物类化合物的分离筛选方法。

背景技术

植物寄生线虫(PPNs)在全球每年造成约1570亿美元的农作物损失。其中，南方根结线虫(RKNs)被认为是世界上主要的植物寄生线虫物种，影响了许多一年生和多年生植物物种的数量和质量，如番茄、胡椒、西瓜和洋葱。化学杀虫剂是传统的杀线虫剂的来源。然而，化学杀虫剂的连续使用使得线虫群体对其逐渐产生抗药性，同时也对环境污染和对人类、哺乳动物和其他非目标生物产生不良作用；当然，这种化学杀虫剂的持续使用也导致了自然生物控制系统的中断和昆虫种类的暴发。因此，迫切需要开发环境友好的替代品，以确保食品安全及生态安全问题。植物次生代谢产物因为具有可降解性，对环境无污染，对哺乳动物无毒等优点，引起了人们广泛的关注。近些年来，关于植物次生代谢产物对防治南方根结线虫线虫的研究也逐渐增多。绵毛马兜铃是一种马兜铃属多年生草本植物，主要分布在中国西南地区。据报道，马兜铃属植物具有丰富的生物活性成分，包括马兜铃酸、马兜铃内酰胺、其他生物碱和萜类化合物等，其在医药和农业化学等领域均受到了广泛的关注。而关于绵毛马兜铃的化学成分和生物活性的研究的相关报道则很少。前期研究发现，绵毛马兜铃的甲醇浸膏对RKNs有很强的线虫活性。通过广泛的文献调研，目前并未有关于马兜铃属植物材料对线虫活性研究的相关报道，也未有其生物活性成分对线虫活性研究的相关报道，这可能有助于新一类植物性杀虫的植物次生代谢产物的发现。因此，我们通过生物活性导向法，获得了三种线虫活性化合物，通过核磁谱分析为化合物A、B、C，并将其对2龄线虫活性进行了进一步的毒力评价比较，为进一步的先导化合物的发现和结构修饰奠定基础。

发明内容

针对以上现有技术的不足之处，本发明提供一类潜在的绿色的有效防治南方根结线虫的马兜铃酸及其衍生物类化合物的分离筛选方法。

本发明采取的技术方案如下：

一类潜在的绿色有效防治南方根结线虫的马兜铃酸及其衍生物类化合物的分离筛选方法，包括以下步骤：

将马兜铃属植物枝干剪成小段、烘干、粉碎、甲醇提取、然后经石油醚、氯仿萃取，浓缩，取萃取所得石油醚浸膏和氯仿浸膏分别进行二次硅胶柱层析洗脱，并结合反复凝胶柱层析、沉淀和重结晶的方法进行分离纯化。

优选的，所述的一类潜在的绿色有效防治南方根结线虫的马兜铃酸及其衍生物类化合物的分离筛选方法，包括以下步骤：

S1：取10～30kg马兜铃属植物枝干剪成小段，50～60℃烘干8～10h、粉碎，加入4L甲醇常温浸提，重复2次以上，抽滤，所得滤液于40～55℃减压蒸发得2～3kg的甲醇浸膏；

S2：将甲醇浸膏加入到1～3L蒸馏水中溶解，加入1～3L石油醚萃取，重复2次以上；水溶液部分继续用1～3L氯仿萃取，重复2次以上；在减压下蒸发，分别得到石油醚浸膏和氯仿浸膏；