[发明专利]一种双通道荧光成像检测活细胞中微量Fe3+、Hg2+和Cu2+的方法

权利要求书

1.一种双通道荧光成像分别检测活细胞中微量Fe³⁺、Hg²⁺和Cu²⁺的方法，其特征在于：是以一种三胺乙基胺衍生物作为探针，通过双通道荧光成像分别检测活性细胞中微量Fe³⁺、Hg²⁺和Cu²⁺；所述的探针的化学结构式为：

2.如权利要求1所述的双通道荧光成像分别检测活细胞中微量Fe³⁺、Hg²⁺和Cu²⁺的方法，其特征在于：所述的以一种三胺乙基胺衍生物作为探针，通过双通道荧光成像分别检测活性细胞中微量Fe³⁺、Hg²⁺和Cu²⁺；是先用探针与细胞孵化使探针进入细胞内，再将孵化有探针的细胞分别与Fe³⁺、Hg²⁺、Cu²⁺孵化，使探针分别与Fe³⁺、Hg²⁺、Cu²⁺在细胞内结合生成能发射特征波长荧光的探针-Fe³⁺、探针-Hg²⁺、探针-Cu²⁺配合物，实现探针对细胞内离子染色成像，用荧光倒置显微镜观测孵化后的活性细胞荧光像；具体包括以下步骤：

(1)细胞培养：活性细胞经复苏接种于培养液中，在温度为37℃，5％CO₂及饱和湿度为100％的培养箱中培养，传代后，接种于12孔板中培养，密度为2×10⁴个/ml，次日用新鲜培养液清洗细胞；所述的培养液含10％胎牛血清、1％双抗以及89％改良型RPMI 1640培养基；

(2)探针对细胞孵育：将步骤(1)的细胞中加入含5～40μM探针的孵育培养液中，该孵育培养液的组成为90％培养液，8％H₂O，2％乙腈，培养箱内孵育30～80min，吸出含探针的孵育培养液，用新鲜的培养液清洗细胞，置于荧光倒置显微镜下分别进行明场和暗场拍照，明场下观察到细胞清晰的图像，暗场下没有观察到细胞图像；

(3)Fe³⁺对细胞染色：在步骤(2)的细胞中加入含30～80μM Fe³⁺的染色培养液，该染色培养液的组成为95％培养液和5％H₂O，培养箱内孵育30～80min，吸出含Fe³⁺的染色培养液，用新鲜的培养液清洗细胞，置于荧光倒置显微镜的红色通道下观察探针对细胞内Fe³⁺染色后的荧光像，细胞呈现明亮的红色荧光，拍摄得到清晰的红色荧光细胞轮廓影像；再将上述经探针和Fe³⁺分别染色后的细胞置于荧光倒置显微镜的绿色通道下观察探针对细胞内Fe³⁺染色后的荧光像，细胞呈绿色荧光，拍摄得到绿色荧光细胞轮廓影像，探针在活性细胞中检测到微量Fe³⁺离子；

(4)Hg²⁺对细胞染色：在步骤(2)的细胞中加入含30～80μM Hg²⁺的染色培养液，该染色培养液的组成为95％培养液和5％H₂O，培养箱内孵育30～80min，吸出含Hg²⁺的染色培养液，用新鲜的培养液清洗细胞，置于荧光倒置显微镜的红色通道下观察探针对细胞内Hg²⁺染色后的荧光像，细胞呈现明亮的红色荧光，拍摄得到清晰的红色荧光细胞轮廓影像；再将上述经探针和Hg²⁺分别染色后的细胞置于荧光倒置显微镜的绿色通道下观察探针对细胞内Hg²⁺染色后的荧光像，细胞呈绿色荧光，拍摄得到绿色荧光细胞轮廓影像，探针在活性细胞中检测到微量Hg²⁺离子；

(5)Cu²⁺对细胞染色：在步骤(2)的细胞中加入含30～80μM Cu²⁺的染色培养液，该染色培养液的组成为95％培养液和5％H₂O，培养箱内孵育30～80min，吸出含Cu²⁺的染色培养液，用新鲜的培养液清洗细胞，置于荧光倒置显微镜的绿色通道下观察探针对细胞内Cu²⁺染色后的荧光像，细胞呈明亮的绿色荧光，拍摄得到清晰的绿色荧光细胞轮廓影像，探针在活性细胞中检测到微量Cu²⁺离子。