[发明专利]一种基于石墨烯、硫堇和核酸适配体检测甲胎蛋白的方法

说明书

一种基于石墨烯、硫堇和核酸适配体检测甲胎蛋白的方法，采用电沉积技术在丝网印刷电极表面沉积纳米金，通过静电吸附作用将滴在电极表面的石墨烯和硫堇吸附到丝网印刷电极表面，利用硫堇作为桥分子捕获核酸适配体到修饰电极表面。利用石墨烯巨大的比表面积和信号放大作用，利用硫堇对适配体的高负载能力以及适配体对甲胎蛋白的特异性识别作用，建立能特异性检测甲胎蛋白水平的纳米适配体生物传感器。通过差分脉冲伏安法检测出峰值电流，并描绘出该电流与甲胎蛋白浓度的关系曲线，实现对甲胎蛋白的检测，达到时间短，成本低，特异性高。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测甲胎蛋白的方法。

背景技术

甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein, AFP）是白蛋白家族的一种糖蛋白，它是由590多个氨基酸残基形成的单多肽链，甲胎蛋白在正常成人体内的含量很少，而在肝癌患者体内甲胎蛋白的含量和肝细胞癌的分化程度有关。AFP检测方法主要有酶联免疫吸附法、荧光免疫分析法、电化学发光法和电化学免疫传感器。然而，常规的免疫测定具有其固有的缺点，例如酶联免疫法存在放射性污染，免疫分析中使用的酶和抗体的活性易受外界温度、pH值的影响，在电极表面不稳定，且价格昂贵。SU等人2010年构建了一种基于硫堇/纳米金自组装膜的电化学免疫传感器来检测人体血清中AFP的含量（SU B, TANG J, CHEN H, et al.Thionine/nanogold multilayer film for alpha-fetoprotein in electrochemicalimmunoassay of humanrerun using biofunctional double-codified goldnanoparticles[J]. Analytical Methods, 2010, 2(11):1702-1709）。 Zhai等人2016年将碳化钼纳米管用做纳米载体来固定硫堇分子以构成电化学免疫传感器检测AFP（Zhai Q,Zhang X, Li J, et al. Molybdenum carbide nanotubes: a novel multifunctionalmaterial for label-free electrochemical immunosensing[J]. Nanoscale, 2016, 8(33):153-158）。 Ni Hui等人2016年将AFP抗体固定在聚乙二醇/纳米金/聚苯胺修饰的金电极上构建了一种用于检测AFP的电化学免疫传感器（Hui N, Sun X, Song Z, Niu S,Luo X. Gold nanoparticles and polyethylene glycols functionalized conductingpolyaniline nanowires for ultrasensitive and low fouling immunosensing ofalpha-fetoprotein. Biosens Bioelectron. 2016, 86:143-149）。这些方法操作复杂、成本高且技术要求高，因此需要建立一种快速、灵敏、操作简便的AFP检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于石墨烯、硫堇和核酸适配体检测AFP的方法，解决传统AFP检测方法费用昂贵、操作复杂且技术要求高的问题。

为了解决上述技术问题，本发明使用核酸适配体代替抗体，利用适配体对AFP的高特异性来捕获AFP，通过石墨烯巨大的比表面积和信号放大作用，利用硫堇做信号指示剂来实现AFP的检测。与现有的方法相比，操作相对简单，而且时间和费用的消耗更少。