[发明专利]真菌快速保存方法

说明书

本发明涉及真菌快速保存方法，采用改进的滤纸片法保存真菌，采用设有虚线的滤纸片保存真菌，菌丝可以透过滤纸生长，生长过程中接触充足的营养，菌丝生长良好。本发明在贴纸片操作和回收纸片操作环节加以改进，可以大幅度节省时间，省时省力，且污染率较常规方法低，极大地提高了工作效率。该方法在贴纸片步骤中每贴一个培养皿的纸片要比传统方法节省将近87％，在回收保存纸片步骤中每收一个培养皿的纸片要比传统方法节省约55％，大大提高了工作效率、减轻了劳动强度。并且该方法所用时间短，在实际操作中很大程度上降低了污染率。

技术领域

本发明涉及微生物的保存方法，具体地说，涉及真菌快速保存方法。

背景技术

真菌是与人们生活紧密相关的一类生物，作为自然界的分解者是生物链的重要一环，也可以引起农作物、动物和人类的很多病害。例如，真菌引起的稻瘟病在气象条件适合稻瘟病发生的情况下，可引起水稻大量减产，极端情况甚至颗粒无收。因此研究和理解真菌对发展科技，改善人民健康，保障我们的粮食安全等都具有重要意义。而这些研究都需要培养和保存大量的真菌。

真菌的保存方法有很多，有继代培养保存法、矿物油保存法、蒸馏水保存法、甘油冷冻保存、低温冷冻保存法、冷冻真空干燥保存法等。继代培养保存法操作简单，一般3-6月转接一次。但是频繁的转接会使改变易发生变异真菌的生物性状，如多次继代会改变稻瘟菌的产孢能力和致病力，污染菌种的概率也较大。矿物油保存是在长满真菌的斜面培养基上覆盖一层矿物油，一般1年转接一次，菌种特性不易发生改变，但是保存占用较大空间。蒸馏水保存是将菌丝块放入蒸馏水中并密封放于室温或4℃，可存活数年，但同样不方便贮存。冷冻真空干燥保存法可以保存几年、几十年或者更长时间，避免多次转接造成污染和变异，但技术、设备要求高，不适于普通实验室大量采用。低温冷冻保存法的菌丝或孢子附着载体为滤纸片、高粱粒、大麦粒或者稻秆等，冷冻条件为-20℃冰箱、-80℃冰箱或者液氮等。低温干燥条件可以较好保存菌种的活性，在实验室条件下也可以普遍采用。由于保存吸附在滤纸上的孢子需要抽取真空，步骤较为繁琐，一般多保存菌丝。采用高粱粒、大麦粒、稻秆等载体可以大量保存菌种，但保存过程复杂，容易发生霉变污染，保存占用体积也较大。因此滤纸作为干燥菌丝是一个较好的选择，通常的滤纸片低温冷冻保存菌种的方法也较为经济适用。操作方法是把滤纸片剪成3-5mm的小纸片，灭菌后贴在固体培养基上，待菌丝长满培养基平面后即可回收滤纸片，干燥后装入硫酸纸袋，置于低温冷冻保存。但是贴滤纸片和回收滤纸片的过程较为费时费力且容易污染，对于大量稻瘟病菌及其他真菌保存来说更是需要较多时力。随着研究范围的不断扩大和研究的深入，科研人员需要大量的真菌菌株作为研究样本，并且需要作为菌种保存起来，方便日后的使用及研究。但是依靠以往的保存方法保存大量菌种需要大量的时力，甚至不能实现菌种的大批量保存。因此，亟待开发一种耗时短，效率高，污染少的方法进行妥善保存。

发明内容

本发明的目的是提供一种改进的滤纸片保存真菌的方法。

本发明构思如下：目前保存真菌的滤纸片法是将滤纸片剪成边长0.3-0.5cm的小滤纸片，贴在培养基上。其不足之处在于将大纸片剪成小纸片效率低，将小纸片贴在培养基上费时费力，而且容易污染，菌丝长满后回收纸片也较为耗时繁琐。发明人力图从滤纸片制作，贴纸片操作和回收纸片操作上加以改进，以提高工作效率，降低污染率。

为了实现本发明目的，本发明提供的真菌快速保存方法，采用改进的滤纸片法保存真菌，包括以下步骤：

1)将滤纸片用虚线刀划间隔0.3cm-0.5cm的方格虚线，然后根据培养皿直径大小，将滤纸片剪裁成与培养皿直径大小相匹配的圆形、方形或多边形，并在剪裁好滤纸片中央开设直径为0.3cm-0.5cm的圆孔或边长为0.3cm-0.5cm的方形孔，完成滤纸片制作；高温灭菌；

2)配制培养基，灭菌后将培养基分装在培养皿中，待培养基凝固后，将上述制作好的滤纸片贴在培养基上，将菌丝块放在培养基中央，密封后置于培养箱中培养；