[发明专利]红豆杉中10‑DAB快速半定量测量方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，属于测量方法技术领域。

背景技术

10-DAB是红豆杉提取物，来源于红豆杉（Taxaceae）属植物的枝叶，是合成紫杉醇和多烯紫杉醇的前体产品。现有技术中，红豆杉中10-DAB的测定方法需要使用到高效液相色谱仪，步骤较为繁琐，测定较慢，成本较高，不适宜于田间进行大规模高含量植株的筛选。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，提高了高含量红豆杉植株的筛选速度，降低了筛选成本，适用于初期半定量筛选。

按照本发明提供的技术方案，所述红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）剪取多株待测量红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取3-5g，用剪刀剪碎，得到多组碎片；

（2）将步骤（1）得到的多组碎片加入10-15ml浓度90%的甲醇溶液在超声水浴中震荡，提取红豆杉叶片中的10-DAB，提取后定容至50ml，得到多组待测溶液；所述水浴温度为37-38℃；

（3）取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，加入浓度90%的甲醇制成每1ml含2mg 10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照品溶液；

（4）吸取多组待测溶液和对照品溶液各5-6ul，点于硅胶G薄层板上，使用展开剂展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，110-120℃加热至斑点显色清晰；

（5）将多组待测量红豆杉斑点与对照品斑点进行对比，根据斑点的深浅及大小判断多株红豆杉植株中10-DAB含量的高低以及高低排序。

进一步的，所述步骤（2）中，超声波水浴的震荡次数为3-4次，每次震荡30-40分钟。

进一步的，所述展开剂为二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇=8:10-12:0.6-0.8。

进一步的，所述硫酸乙醇溶液的浓度为10-15%。

本发明所述红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，只需使用超声仪即可进行植株含量的初步筛选，并且能够实现多株植株含量的高低排序，大大提高了筛选的成本和速度，适用于初期半定量筛选。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例一：一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，包括以下步骤：

（1）剪取红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取5g，用剪刀剪碎；

（2）将步骤（1）得到的碎片在超声水浴中震荡三次，每次加入15ml浓度90%的甲醇溶液，每次放在超声仪内水浴震荡30分钟，水温37℃，水面超过试管内甲醇的液面，提取后定容至50ml，震荡摇匀，得到待测溶液；

（3）取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ（纯品），加浓度90%的甲醇制成每1ml含2mg10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照品溶液；

（4）吸取待测溶液和对照品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇=8:12:0.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度10%的硫酸乙醇溶液，110℃加热至斑点显色清晰；

（5）将测量植株斑点与对照品斑点进行对比，根据斑点的深浅及大小判断测量植株10-DAB含量与对照相比的高低。

实施例二：一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，包括以下步骤：

（1）剪取红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取3g，用剪刀剪碎；

（2）将步骤（1）得到的碎片在超声水浴中震荡4次，每次加入10ml浓度90%的甲醇溶液，每次放在超声仪内水浴震荡40分钟，水温38℃，水面超过试管内甲醇的液面，提取后定容至50ml，震荡摇匀，得到待测溶液；

（3）取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ（纯品），加浓度90%的甲醇制成每1ml含2mg10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照品溶液；

（4）吸取待测溶液和对照品溶液各6ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇=8:12:0.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度15%的硫酸乙醇溶液， 120℃加热至斑点显色清晰；

（5）将测量植株斑点与对照品斑点进行对比，根据斑点的深浅及大小判断测量植株10-DAB含量与对照相比的高低。

实施例三：一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，包括以下步骤：

（1）剪取多株红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取4g，用剪刀剪碎，得到多组碎片；