[发明专利]一种虾蟹类富水性组织的石蜡切片制作方法

说明书

本发明涉及一种虾蟹类富水性组织的石蜡切片制作方法；常规的石蜡组织切片方法指标对于组织形态难固定、质地柔软、富水性的虾蟹类组织器官缺乏组织区分度，易造成组织破碎、重叠、折曲，严重影响组织的显微观察效果，难以获得理想清晰的组织结构。本发明通过对样品的负压、固定和包埋处理进而定型组织、延展组织避免褶皱重叠和因富水性组织的弹性而存在误差。本发明操作简便、可行性强、周期短，对于组织形态难固定、质地柔软、富水性的虾蟹类组织器官具有很好的组织区分度，可以实现完整的组织形态的石蜡切片观察，能满足研究人员对切片组织观察的全部要求。

技术领域

本发明涉及一种虾蟹类富水性组织的石蜡切片制作方法，属于显微组织切片技术领域。

背景技术：

虾蟹类组织石蜡切片技术是研究动物组织形态和病理学变化的一种重要技术。由于虾蟹类是水生动物，其各种组织器官的含水量较高，尤其是经常作为病理学研究依据的鳃组织和肝胰腺(中肠腺)组织。近年来，对虾蟹类以上两种组织开展研究过程中取材量大、试剂用量较多，出于经济考虑，传统技术仍作为广泛使用技术。技术一般包括取材及固定、流水冲洗、组织脱水、组织透明、渗蜡包埋、切片展片、脱蜡和HE染色、光镜显微观察等步骤。而常规的方法指标对于组织形态难固定、质地柔软、富水性的虾蟹类组织器官缺乏组织区分度，易造成组织破碎、重叠、折曲，严重影响组织的显微观察效果，难以获得理想清晰的组织结构。本发明旨在弥补现有方法在处理虾蟹类等富水性动物及其组织的技术不足，以获得理想的组织器官石蜡切片图像。

发明内容：

为了解决上述问题，本发明提供了一种虾蟹类富水性组织的石蜡切片制作方法。

一种虾蟹类组织的石蜡切片制作方法，步骤如下：

1、将样品组织放于组织固定液中，立即负压固定，负压至样品组织块膨胀饱满、不再产生气泡；再立即加入到盛有相同浓度的组织固定液的适宜体积的离心管中，离心管中组织固定液的量与样品组织体积之比为20：1；避免组织块贴于容器壁上，室温(20—25℃)恒温固定4-6h；所述负压的压力值为-1.25kpa；负压容器总容积(V₁)：容器中组织固定液总体积(V₂):样品组织体积(V₃)＝6:3:1；

所述组织固定液为溶质质量分数2.5％的多聚甲醛溶液；多聚甲醛溶液具体制备方法为：取多聚甲醛50g，1×PBS缓冲溶液900ml，加水至1000ml，混合后60℃下水浴24h，若还有未溶解的多聚甲醛，滴加1-2滴1当量(1mol/L)的NaOH溶液，调节PH为6.8-7.2，4℃下保存；

所述1×PBS缓冲溶液(0.01M)的组份为：Na₂HPO₄ 8mM，NaCl 136mM，KH₂PO₄ 2mM，KCl 2.6mM，PH＝7.2-7.4；

所述1当量(1mol/L)的NaOH溶液为：称取NaOH固体粉末10g，用250mL的容量瓶配置成250mL、1mol/L的NaOH溶液。

2、将步骤1)固定后的样品组织放入包埋盒中，用流动清水不间断流动冲洗包埋盒24h；洗除样品组织中残留的固定液；冲洗完毕后用擦镜纸包好。

3、对冲洗完毕的样品组织在常温(25℃左右)下，依次用梯度浓度为30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％的乙醇溶液脱水处理；浓度为30％的乙醇溶液脱水处理时间分别为4h-5h；浓度为40％、50％、60％、70％的乙醇溶液脱水处理时间分别为40min-1h，浓度为80％、90％、100％的乙醇脱水处理时间分别为15min-35min；当乙醇溶液浓度≤70％时，所述乙醇溶液与样品组织的体积比为50:1；当乙醇溶液浓度≥70％时，所述乙醇溶液与样品组织的体积比为35:1；脱水处理完成后将装有样品组织的包埋盒从无水乙醇溶液中取出。

4、将步骤3)中取出的包埋盒放入透明剂中进行透明处理。