[发明专利]一种小鼠脑片冻存液

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于保存组织细胞的冻存液，具体涉及一种小鼠脑片冻存液。

背景技术

在神经科学研究领域，通常需要对实验动物的脑组织进行观察分析。现有技术中在对实验动物脑部进行形态学观察如组化及免疫组化时，通常使用贴片法或漂片法。

其中贴片法是在冰冻切片(通常在-20℃条件下进行)时连续取片，然后贴在载玻片上，置于-80℃条件下保存，这种方法可以长期保存(至少一年时间)，但成本较高，不仅需要用到低温冰箱，而且因载玻片较多(一个脑组织需要用很多盒载玻片)会占用较多低温空间；此外，在做后续实验时尤其是做免疫组化时，易形成空洞且易脱片，造成结果的损失，效果不及漂片法好。

漂片法是在冰冻切片时连续取片，按照次序将脑片放入充满0.1mol/LPBS的12或24孔板内，后续可直接取需要的脑片在48孔板中进行后续实验，最后再贴片至载玻片上，既节省抗体又不会造成脱片，染色均匀效果好，但这种方法的不足就是不能长期保存，在4℃条件下不能超过一周。

脑组织的标本较难取得，尤其是某些疾病模型或特殊药物处理的难度更高。在对脑组织进行观察分析时，由于实验结果的不可预估性以及实验方案的易变性又决定了研究人员随时需要脑片进行补充试验，因此，提供一种无需使用低温冰箱但仍能完好保存脑片的低成本冻存液尤为重要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种成本低且保存效果好的小鼠脑片冻存液。

本发明所述的小鼠脑片冻存液，每1L所述冻存液的组成为：

蔗糖300g、0.1mol/L PB 350-450ml、余量为乙二醇。

本发明所述技术方案中，PB为磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer)的简称。

上述小鼠脑片冻存液优选的配方为：每1L所述冻存液的组成为：

蔗糖300g、0.1mol/L PB 380-420ml、余量为乙二醇。

上述小鼠脑片冻存液最佳的配方为：每1L所述冻存液的组成为：

蔗糖300g、0.1mol/L PB 400ml、余量为乙二醇。

本发明所述冻存液按现有常规方法进行配制，具体地，先取配方量的蔗糖置于容量瓶中，然后加入配方量的0.1mol/L PB，待蔗糖溶解后加入乙二醇定容至1L即可。

与现有技术相比，本发明的特点在于：

1、本发明所述冻存液配方简单，将冰冻切片后的脑片置于本发明所述冻存液中，于-20℃条件下可完好保存至少6个月(不会被冻结或形成冰晶)，相比现有技术中-80℃的保存条件，无需使用低温冰箱，仅用常规民用冰箱的冷冻层即可实现，成本更低。

2、对采用本发明所述冻存液长时间保存的脑片分别进行常规尼氏染色和免疫组化DAB染色的实验，结果表明：脑片在本发明所述冻存液中长时间的存放后，脑片的形态和结构保存完整，且对免疫组化没有影响。

3、采用本发明所述冻存液保存的脑片在使用贴片法进行观察分析时，由于脑片在冻存液中的保存温度与切片温度相同，可以有效降低组化实验时形成空洞的机率。

附图说明

图1为本发明所述实验例1中冰冻切片后直接进行尼氏染色时的脑片整体的高倍镜图(光学显微镜×10倍)；

图2为本发明所述实验例1中冰冻切片后直接进行尼氏染色时的脑片皮质处的高倍镜图(光学显微镜×400倍)；

图3为本发明所述实验例1中冰冻切片后直接进行尼氏染色时的脑片纹状体处的高倍镜图(光学显微镜×400倍)；

图4为本发明所述实验例1中冰冻切片后直接进行尼氏染色时的脑片海马处的高倍镜图(光学显微镜×400倍)，其中(a)为海马CA1处的高倍镜图，(b)为海马CA3处的高倍镜图，(c)为海马DG处的高倍镜图；

图5为本发明所述实验例1中冰冻切片后直接进行免疫组化DAB染色的染色图(光学显微镜×200倍)；

图6为本发明所述实验例1中置于1#冻存液保存6个月的脑片整体的高倍镜图(光学显微镜×10倍)；

图7为本发明所述实验例1中置于1#冻存液保存6个月的脑片皮质处的高倍镜图(光学显微镜×400倍)；

图8为本发明所述实验例1中置于1#冻存液保存6个月的脑片纹状体的高倍镜图(光学显微镜×400倍)；

图9为本发明所述实验例1中置于1#冻存液保存6个月的脑片海马处的高倍镜图(光学显微镜×400倍)，其中(a)为海马CA1处的高倍镜图，(b)为海马CA3处的高倍镜图，(c)为海马DG处的高倍镜图；