[发明专利]一种检测血液自身抗体的肺癌诊断试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种检测血液自身抗体的肺癌诊断试剂盒及其应用。本发明提供了包含SRSF7、TRNP1、RBM42、GGA2、XAGE3、ZNF696、FADD、HOMER1、UBQLN2、SNAPC2任一种或几种的蛋白或其片段在制备肺癌诊断试剂或试剂盒中的应用，还提供了一种肺癌诊断试剂盒，其构成包括固相基质、以上蛋白自身抗体的特异性结合配偶体、第二种特异性结合配偶体和可检测基团。利用本发明的试剂盒可以简单、快速诊断肺癌，包括肺癌的早期诊断、可疑肺癌的风险预测及良恶性分组、复发监控和用药伴随诊断等，具备优异的敏感性和特异性，诊断效能高。

技术领域

本发明涉及医学诊断技术领域，具体地说，涉及一种检测血液中特定自身抗体的肺癌诊断试剂盒及其应用。

背景技术

世界卫生组织全球疾病负担研究显示癌症是全球和中国仅次于心血管疾病的高死亡率疾病。癌症的早期诊断对于癌症治疗方式的选择和治疗疗效具有重要的意义。然而对于许多类型的癌症而言，仍缺乏好的早期诊断指标和筛查技术，导致确诊时已为晚期。以肺癌为例，尽管医学影像技术的普及提高了早期检测肺癌的能力，然而大部分肺癌患者确诊时已是晚期疾病。即使医学影像发现肺部小结节，也有相当患者因无法确定小结节的良恶性而延迟治疗机会。因此基于血液的早期检测策略具有必要性。

目前已知早期肿瘤细胞可表达产生某些异常蛋白，可被机体免疫系统识别后产生特异的抗体，这些蛋白被称为肿瘤相关抗原，其抗体则称为自身抗体。检测自身抗体可间接反应肿瘤相关抗原的存在。许多研究表明肿瘤抗原产生的自身抗体是肿瘤早期诊断较好指标[1]，并亦可用于肿瘤的复发监控、疗效监控及用药伴随诊断等[2]。早期的研究分别采用SEREX(重组cDNA表达文库血清学筛选)法[3]，噬菌体肽库淘选法[4]，SERPA(血清蛋白组学)[5]等方法对肿瘤的自身抗体进行筛选，获得了一批已公开的肿瘤自身抗体用于肿瘤的诊断。如NY-SEO-1、p53、Annexin I、14-3-3θ、LAMR1、PGP9.5、c-myc、HER2、CAGE、GBU-4-5、SOX2等自身抗体用于肺癌诊断[6-8]；p62、HCC1等自身抗体用于肝癌诊断[9,10]；NPM1、MDM2、PLAT、c-Myc、p53、RalA等自身抗体用于卵巢癌诊断；p53、HSP70、HCC-22-5、peroxiredoxin VI、KM-HN-1、p90等自身抗体用于胃癌诊断[11]。

专利文献CN101625360A，公开日2010.01.13，公开了一种肺癌特异性自身抗体酶联免疫检测试剂盒，由固相载体和包被在其表面的含有肺癌抗原肽I、肺癌抗原肽II、肺癌抗原肽III、肺癌抗原肽IV、肺癌抗原肽V和肺癌抗原肽VI的六个重组噬菌体液各100-200μl，等量分别包被到固相载体上不同的酶标孔中所组成，所述重组肺癌特异抗原肽是利用T7噬菌体将肺癌cDNA文库展示到噬菌体表面，并经亲和筛选和血清学分析从中筛选出的，它具有检测肺癌病人血清中由于肿瘤刺激所产生的自身抗体的能力，为早期肺癌患者提供了有效的检测手段。专利文献CN103383395A，公开日2013.11.06，公开了一种用于检测肺癌自身抗体的液相芯片试剂盒，包括偶联抗原蛋白的微球、生物素标记的二抗、链霉亲和素-藻红蛋白、反应缓冲液和稀释缓冲液，抗原蛋白为p62、NY-ESO-1、p53和CAGE中的至少两种，其中，偶联不同抗原蛋白的微球具有不同的颜色编码，二抗为抗人免疫球蛋白G，该发明的液相芯片试剂盒在液相芯片的技术平台上实现了对血清中四种抗体的联合检测，以p62抗体、NY-ESO-1抗体、p53抗体和CAGE抗体为标志，检测准确性较高。

然而以上述已公开的自身抗体用于肺癌诊断仍有不足，发现新的肺癌自身抗体，对于改善诊断精确度具有重要价值。

目前国内外研究表明不同疾病的自身抗体谱均不同，因此获得特定疾病的自身抗体谱对相关诊断具有重要意义。特定疾病自身抗体的发现是通过其识别抗原来进行定义和筛选，方法均基于抗原-抗体特异性结合的免疫检测。抗原的来源包括重组表达蛋白、cDNA表达库、细胞或组织分离的蛋白组等，筛选方法主要是免疫印迹、高通量蛋白质芯片、酶联免疫吸附等。