[发明专利]乳酸乳球菌乳酸亚种菌株、酶制剂及其降解农药残留的应用

说明书

本发明公开了乳酸乳球菌乳酸亚种菌株、酶制剂及其降解农药残留的应用。本发明提供了乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)FY‑5菌株，其保藏编号为CGMCC No.13521。本发明还提供了菌株的筛选、诱导、驯化和农药农残降解活性酶制备方法，即以毒死蜱为碳源进行目的菌筛选，将目的菌于单一农药和混合农药进行诱导驯化。将菌株进行发酵，收集菌体，破胞、离心，上清液可制备农残降解酶制剂，可用于蔬果农药残留的降解，在降解蔬果农残方面具有应用潜力。

技术领域

本发明涉及生物技术降解农药残留领域，尤其涉及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株筛选、诱导驯化及在去除蔬果中农药残留的应用。

背景技术

随着近年来农药的品种、产量及使用量剧增，在农业生产过程中混合施用多种农药的现象时有发生且较为严重，造成多种农药出现在同一产品中。食用农残超标的蔬菜水果会危害神经中枢、使神经传导功能紊乱；可诱发突变，导致畸形，影响后代健康；能诱发肝脏酶的改变，令肝脏肿大以致坏死；能侵犯肾脏而引起病变。残留农药在人体内蓄积，超过一定限度后会导致一些慢性疾病，如肌肉麻木、咳嗽等，甚至会诱发血管疾病、糖尿病和癌症等。

生物修复技术是80年代以来出现和发展的清除和治理环境污染的生物工程技术，其主要利用生物特有的分解有毒有害物质的能力，去除污染环境如土壤中的污染物，达到清除环境污染的目的。微生物具有较强的适应和被驯化的能力，通过一定的适应过程，微生物产生相应的酶系，或通过基因突变等建立新的酶系来降解新的农药。

提高食品安全具有重大的意义，但目前，尚未见到利用菌株或由其制成的酶制剂降解蔬果中的混合农药残留的报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供经筛选、农药诱导、驯化得到的一株乳酸乳球菌乳酸亚种菌株。

本发明提供的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株(记为FY-5)，其保藏编号为CGMCC No.13521。

所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株经筛选目的菌株、以及对目的菌株经单种农药及混合农药诱导、驯化获得，包括以下步骤：

1)将筛选的目的菌株复壮；

2)利用农药毒死蜱配制含不同有效成分浓度农药的培养基，将步骤1)复壮的目的菌株划线接种、培养并通过不断的诱导培育(通过不断提高农药含量)，培育出能耐受较高的毒死蜱浓度的目标菌株；

3)将农药毒死蜱、多菌灵、腐霉利和烯酰吗啉等浓度混合，并经稀释至一定浓度后添加进培养基内，配制成含不同有效成份浓度农药的培养基。再将步骤2)得到的目标菌株划线接种、培养并通过不断的诱导培育(通过不断提高农药含量)，培育得到耐受较高的农药浓度的菌株，最终分离得到一株乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)菌株(记为FY-5)。

本发明的第二个目的是提供一种生产生物降解酶的方法。

本发明提供的生产生物降解酶的方法，包括以下步骤：将上述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株FY-5发酵后，收集菌体、破胞、离心，提取上清液，得到生物降解酶溶液。

上述生产生物降解酶的方法中，所述发酵的条件为在34-39℃、180-200rpm培养16-24小时。

上述生产生物降解酶的方法中，所述发酵采用的发酵培养基的组分如下：每升所述发酵培养基包括胰蛋白胨15-19g、植物蛋白胨1-5g、氯化钠2-5g、磷酸氢二钾2-5g及葡萄糖2-5g，用水补足体积；发酵培养基的pH值为6.0-7.0，优选为6.3-6.7。