[发明专利]南方红豆杉愈伤组织诱导方法

权利要求书

1.一种南方红豆杉愈伤组织诱导方法，其特征是：，包括以下步骤：

（1）材料选择：选择当年生的南方红豆杉嫩枝；

（2）愈伤组织诱导用培养基：

愈伤组织诱导用培养基的基本成分采用B5培养基的微量元素、有机物和铁盐，每升愈伤组织诱导用培养基中加入蔗糖25～30g、植物凝胶2～2.5g、生长素NAA 1mg、2,4-D 1mg、细胞分裂素KT 0.1mg，酸碱度调节至5.6～5.8，配置好的培养基用培养瓶分装，经高温、高压灭菌后备用；

（3）材料消毒：对步骤（1）所述的南方红豆杉嫩枝进行消毒处理；

（4）接种：

将南方红豆杉嫩枝取出，用无菌滤纸吸去南方红豆杉嫩枝表面的水分，将南方红豆杉嫩枝切成小段，并切取部分针叶，嫩枝切段用作外植体，接种在愈伤组织诱导用培养基上，接种时要让嫩枝的植物学近地端接触培养基；

（5）愈伤组织诱导：

将步骤（4）中接种好的愈伤组织诱导用培养基放置于培养室中培养，温度25±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间10～12h/d；红豆杉嫩枝和针叶在培养基上2-3周后即开始形成愈伤组织，约4-5周愈伤组织直径可达1-2cm。

2.如权利要求1所述的南方红豆杉愈伤组织诱导方法，其特征是：所述步骤（1）中南方红豆杉嫩枝的取材时间为每年的7-8月。

3.如权利要求1所述的南方红豆杉愈伤组织诱导方法，其特征是：所述步骤（3）中材料消毒的具体过程为：将南方红豆杉嫩枝放入加有含有洗洁精的自来水中浸泡10～15分钟，洗洁精的重量百分浓度为0.01～0.02%，浸泡过程中保持搅动，浸泡结束后用自来水冲洗10分钟以上；再将南方红豆杉嫩枝转入一干净的容器中，随后转入超净工作台上进行无菌操作；首先往容器中加入浓度为70～75%的酒精，加入量为嫩枝体积的10倍以上，浸泡杀菌30～60秒，倒掉酒精，用无菌蒸馏水漂洗一次；再将南方红豆杉嫩枝转入已高压消毒的容器中，加入嫩枝体积10～15倍的升汞溶液，升汞溶液的浓度为0.1～0.15%，浸泡杀菌5～8分钟，浸泡过程中保持摇动，以使升汞溶液与南方红豆杉嫩枝充分接触；倒掉升汞溶液，用无菌蒸馏水冲洗4～6次，每次1～2分钟，以彻底除去升汞。

4.如权利要求1所述的南方红豆杉愈伤组织诱导方法，其特征是：所述步骤（4）中，南方红豆杉嫩枝切成0.5～0.8cm的小段。