[发明专利]下调昆虫害虫中的基因表达

权利要求书

1.用于产生对昆虫害虫物种侵扰具有抗性的转基因植物的方法，所述方法包括：

(a)用包含编码干扰核糖核酸(RNA)的多核苷酸序列的DNA构建体转化植物细胞，所述干扰核糖核酸(RNA)在被昆虫害虫物种摄入后起下调所述昆虫害虫物种中靶基因表达的作用，

其中所述RNA包含至少一个沉默元件，其中所述沉默元件是包含退火互补链的双链RNA区域，其中一条链包含与所述靶基因互补的序列或由其组成，并且

其中所述靶基因选自其核苷酸序列由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:21或者其互补序列组成的基因；

(b)由所述经转化的植物细胞再生植物；和

(c)在适于从所述DNA构建体表达所述干扰RNA的条件下使所述经转化的植物生长，因此所述植物相比于未转化的植物而言对所述害虫具有抗性。

2.权利要求1的方法，其中SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:21或者其互补序列针对马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)进行使用。

3.权利要求1或2的方法，其中所述方法另外包括由所述经转化的植物产生一个或多个子代以及测试所述后代对所述昆虫害虫的抗性的步骤。

4.用于产生对昆虫害虫物种侵扰具有抗性的转基因植物的方法，所述方法包括：

(i)使通过权利要求1或2的方法而获得的转基因植物与第二植物杂交，

(ii)选择对所述害虫具有抗性的后代。

5.权利要求4的方法，所述方法还包括以下步骤：使对昆虫害虫物种侵扰具有抗性的后代植物与所述第二植物回交，以及进一步选择对所述害虫具有抗性的后代。

6.用于产生对昆虫害虫物种侵扰具有抗性的转基因植物的方法，所述方法包括：

(i)使通过权利要求1或2的方法而获得的转基因植物与缺少对昆虫侵扰的抗性的第二植物有性杂交，从而产生多株后代植物；

(ii)选择对所述昆虫害虫物种具有抗性的第一后代植物；

(iii)使所述第一后代植物自交，从而产生多株第二后代植物；

(iv)使所述后代重复自交1、2、3、4或5代；和

(v)从所述后代植物的任一中选择对昆虫害虫物种侵扰具有抗性的植物。

7.权利要求4至6中任一项的方法，其中通过检测编码干扰核糖核酸(RNA)或干扰RNA的多核苷酸序列的存在来鉴定所述昆虫抗性后代，其中所述干扰RNA在被昆虫害虫物种摄入后起下调所述昆虫害虫物种中靶基因表达的作用，其中所述靶基因选自其核苷酸序列由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:21或者其互补序列组成的基因。

8.权利要求4至6中任一项的方法，其中所述第二植物另外包含异源基因。

9.权利要求8的方法，其中所述异源基因编码对植物害虫物种有毒的蛋白质。

10.权利要求9的方法，其中所述蛋白质选自由下列各项组成的组：patatin、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫蛋白、致病杆菌(Xenorhabdus)杀虫蛋白、发光杆菌(Photorhabdus)杀虫蛋白、侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)杀虫蛋白和球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)杀虫蛋白。

11.权利要求10的方法，其中所述苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白选自由下列各项组成的组：Cry1，Cry3，TIC851，CryET170，Cry22，TIC901，TIC201，TIC407，TIC417，双成分杀虫蛋白CryET80和CryET76，双成分杀虫蛋白TIC100和TIC101，杀虫蛋白ET29或ET37与杀虫蛋白TIC810或TIC812的组合，和双成分杀虫蛋白PS149B1。