[发明专利]红细胞渗透脆性检测筛选方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种红细胞渗透脆性检测筛选方法及其应用，属于医学检测领域。

背景技术

红细胞渗透脆性试验能筛查多种贫血，此法主要检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力，用于遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血、阻塞性黄疸等疾病的诊断及珠蛋白生成障碍性贫血等溶血性疾病的检测。珠蛋白生成障碍性贫血原名地中海贫血又称海洋性贫血，是一组遗传性溶血性贫血疾病。由于遗传的基因缺陷致使血红蛋白中一种或一种以上珠蛋白链合成缺如或不足所导致的贫血或病理状态。缘于基因缺陷的复杂性与多样性，使缺乏的珠蛋白链类型、数量及临床症状变异性较大。根据所缺乏的珠蛋白链种类及缺乏程度予以命名和分类。目前，进行海洋性贫血筛选试验多使用传统肉眼观察红细胞溶血率或使用分光光度计比色方法进行测定，操作方法较为繁杂，结果也不客观，检测人员眼睛易疲劳或手工操作比色强度过高而致操作失误致出现临床本可避免的错误结果。临床上进行红细胞渗透脆性试验有MCV法、试管法(手工一管法)和改良红细胞孵育渗透脆性试验(Osmotigility test,OFT)等检测方法。

该方法存在的主要缺陷：1)MCV法需要血象自动分析仪设备，在基层医院很难办到，且结果并非完全可靠；2)试管法每样本需要单独二支试管进行比对；试管法样本与试剂孵育离心后需要将上清转移到另外试管并需要进行两次530nm波长分光光度计比色，然后通过获得的光密度来判断实验结果；3)改良红细胞孵育渗透脆性试验虽然采用微量加样，但是与试剂孵育离心后需要将上清转移到另外酶标板并需要进行两次530nm波长分光光度计比色，然后通过获得的光密度来判断实验结果。以上方法检测后每一样本需要用人工法将光密度值换算成检测结果。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明的目的是提供一种红细胞渗透脆性检测筛选方法，解决了现有的红细胞渗透脆性试验的需要设备昂贵或操作复杂、需要用人工法将光密度值换算成检测结果的缺陷。

(二)技术方案

为了解决上述技术问题，本发明提供的一种红细胞渗透脆性检测筛选方法，包括以下步骤：

S1、于n孔的酶标板中加入红细胞渗透脆性检测试验液，在37℃-40℃的温度下预热1-2分钟；

S2、加入不超过n/2份的待测抗凝全血于酶标板的部分区域的装样孔中，混合均匀，继续在37℃-40℃的温度下，保温5-10分钟；

S3、在装有待测抗凝全血的部分区域中加入终止红细胞溶血试验液，混合均匀，然后进行离心，得到上清液和底液；

S4、移出上清液置于酶标板的另一部分区域的装样孔中；

S5、于底液中加入红细胞溶血试验液，混合均匀；

S6、待血液全部溶血后，制成待检测液，将加入红细胞溶血试验液的部分区域的待检测液与未加入红细胞溶血试验液的另一部分的溶液进行比色，读取光密度并计算出最终结果。

可选的，所述步骤S4中还包括：对移出的上清液进行补水至预定体积。

可选的，步骤S1中所述的红细胞渗透脆性检测液包含氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠。

可选的，步骤S3中所述的终止红细胞溶血液包含氯化钠。

可选的，步骤S5中红细胞溶血液采用皂素制成。

可选的，步骤S3中离心操作的离心速率为(3000-4000)转/分钟，持续5-6分钟。

可选的，步骤S6中比色操作优先的波长为530nm。

可选的，步骤S6中，使用酶标阅读仪同时读取光密度D1(加红细胞溶血试验试验液部分区域的装样孔结果)和D2(加红细胞溶血试验试验液后另一部分区域装样孔的结果)，并按下公式计算出溶血率百分比：

本发明还公开了一种的红细胞渗透脆性检测筛选方法作为血液检测方法的应用，用于检测海洋性贫血。

(三)有益效果

本发明提供的一种红细胞渗透脆性检测筛选方法，其具有以下优点：

本发明提供的检测方法具有简单、微量、快速和大样本的优点，减少筛选工作量，实验快速精确，实验结果重复性好，能自动计算出实验结果。

附图说明

图1为本发明操作步骤流程示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。