[发明专利]一种基于Au@Ag核壳纳米粒子的合成检测汞离子的方法

权利要求书

1.一种基于Au@Ag核壳纳米粒子的合成检测Hg²⁺的方法，其特征在于包括如下具体步骤：

（1）金纳米粒子修饰Hg²⁺的一段适配体DNA

将新合成的金纳米粒子在12000r/min的转速条件下离心去除上清，并用pH8.0 0.01 M的Tris-HCl缓冲液将其进行重悬并浓缩四倍，测得浓缩后的金纳米粒子的浓度为10nM，以用于DNA的偶联；取1mL浓缩后的金纳米粒子，然后加入100μL 10μM的DNA1，使得DNA1的终浓度为1μM，DNA1和金纳米粒子以100:1的摩尔比在室温条件下进行过夜偶联反应，将反应后的金纳米粒子在12000r/min的转速条件下离心以除去未结合的DNA1，然后将其用pH8.0 0.01 M的Tris-HCl缓冲液进行重悬，从而得到修饰后的金纳米粒子；

DNA 1: 5’-SH-AAAAAAGTGACCATTTTTGCAGTG-3’；

（2）抗坏血酸偶联Hg²⁺的另一段适配体DNA

称取50mg抗坏血酸于圆底烧瓶中，用2mL吡啶溶剂将其进行溶解，然后加入34mg琥珀酸酐，在室温下避光搅拌反应2天，然后将反应后的溶液用旋转蒸发仪旋干，再加入5mL pH 6.5的0.01M 2-吗啉代乙磺酸缓冲液将其溶解，置于磁力搅拌反应器上，然后加入150mg碳二亚胺和100mg N-羟基琥珀酰亚胺，在磁力搅拌的状态下将抗坏血酸琥珀酰酯进行活化，反应时间为2-4h；取pH7.4 0.01M的磷酸盐缓冲液溶解的浓度为1μM的氨基修饰的DNA2 500μL，将500μL活化好的抗坏血酸琥珀酰酯加入到DNA2中，在振荡的条件下反应4-6h，得到抗坏血酸偶联的DNA2；

DNA2：5’-NH₂-AAAAAACACTGCTTTTTTGGTCAC-3’；

（3）在Hg²⁺存在的条件下形成包含抗坏血酸的T-Hg²⁺-T错配结构

将1mL步骤（1）中修饰DNA1的金纳米粒子探针和1mL步骤（2）中偶联好的DNA2按照1:1的体积比混合，分装到PCR管中每管100μL，然后在每管中分别加入浓度为0.5ng mL^-1、5ng mL^-1、10ng mL^-1、50ng mL^-1、100ng mL^-1、200ng mL^-1的Hg²⁺，在室温下孵育反应4h后，使得DNA1和DNA2与Hg²⁺充分结合形成T-Hg²⁺-T错配结构；将反应体系在12000r/min的条件下离心去除未结合的DNA2，然后再向每管加入100μL超纯水将金纳米粒子进行重悬；

（4）Au@Ag核壳纳米粒子的形成以及紫外吸收光谱的测定

将步骤（3）中得到的金纳米粒子溶液的pH用NaOH水溶液调整到9.0，然后向每管中加入包含200mM聚乙烯吡咯烷酮的1M硝酸银溶液50μL，在缓慢振荡的条件下反应1-3h，借助于金纳米粒子表面的抗坏血酸作为还原剂将硝酸银进行还原，并在金纳米粒子的表面形成一层银壳，从而形成Au@Ag核壳纳米粒子；将不同Hg²⁺浓度下的Au@Ag核壳纳米粒子分别在520nm和400nm的波长下进行紫外测定，从而得到A520/A400的紫外吸收比值，并建立Hg²⁺浓度和A520/A400的对应关系。

2.根据权利要求1所述的一种基于Au@Ag核壳纳米粒子的合成检测Hg²⁺的方法，其特征在于所述的金纳米粒子的粒径为15nm。

3.根据权利要求1所述的一种基于Au@Ag核壳纳米粒子的合成检测Hg²⁺的方法，其特征在于所述的步骤（2）中抗坏血酸琥珀酰酯的活化时间为3h。

4.根据权利要求1所述的一种基于Au@Ag核壳纳米粒子的合成检测Hg²⁺的方法，其特征在于所述的步骤（2）中抗坏血酸琥珀酰酯加入到DNA2后的反应时间为5h。

5.根据权利要求1所述的一种基于Au@Ag核壳纳米粒子的合成检测Hg²⁺的方法，其特征在于所述的步骤（4）中抗坏血酸还原硝酸银的时间为2h。