[发明专利]一种川贝母种苗培育方法

说明书

技术领域

本发明属于川贝母培养领域，具体涉及一种川贝母种苗培育方法。

背景技术

川贝母是一味传统的名贵中药材，主要功效是润肺、止咳、化痰。最早记录于秦汉时期的《神农本草经》：气温辛，平，无毒，主伤寒烦热... 其后历代医书均有对川贝母用药经验的总结和修正。川贝母主要产西藏（南部至东部）、云南（西北部）和四川（西部），海拔3200-4200米。也见于甘肃（南部）、青海、宁夏、陕西（秦岭）和山西（南部），海拔1800-3200米。通常生于林中、灌丛下、草地或河滩、山谷等湿地或岩缝中。药用川贝母依赖野生资源，过度采挖致使资源逐步枯竭，另一方面市场对川贝母的需求逐年增大。近年来虽有一定的人工栽培，但主要依靠种子播种和鳞茎繁殖，其繁殖系数低，周期长，品质衰退，不能解决川贝母的供求矛盾。目前人工培养的川贝母组多采用愈伤组织诱导的途径进行增殖扩繁，因为愈伤组织途径经过脱分化和再分化两个过程，因此极容易造成遗传变异，致使后代性状分离，品质降低，致使商品川贝母种苗质量不能保证。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种川贝母种苗培育方法，能够保证川贝母种苗品质的纯合与稳定。

技术方案为：

一种川贝母种苗培育方法，包括以下步骤：

（1）种源，选择暗紫贝母作为开发药用川贝母的种源；

（2）组培技术，通过不定芽途径进行增殖，即

a.将新鲜暗紫贝母进行初代诱导，流水冲洗10~30min，10~20%84消毒液浸泡10~20min，在超净台上用75~90%酒精10~30s+0.1~0.2%升汞10~15min，无菌水充分清洗;

b.将外植体切成5mm*5mm大小，在激素比例和糖含量为：MS+6-BA0~2.0mg/L

+NAA0~1.0mg/L+糖30~40g/L+琼脂6~8g/L+活性炭1~2g/L，pH=5.5~6.5的诱导培养基中进行培养，获取川贝母的无菌系；

c.增殖扩繁：MS+KT0~1.0mg/L+NAA0~3.0mg/L+糖30~60g/L+琼脂6~8g/L+活性炭1~2g/L，pH=5.5~6.5，采用变温培养的方式进行增殖，接种后的前30天采用变温培养，后面采用正常的培养条件，不定芽增殖系数为0.9~4.5；

所述变温培养的方式为：有光照周期8h/d，光照条件1500lux~2500lux，温度为25~30℃，无光照暗周期16h/d，温度为14~18℃；

所述正常的培养条件为有光照周期12h/d，光照条件1500lux~2500lux，温度为25~30℃，无光照暗周期12h/d，温度为14~18℃；

（3）种苗脱毒，通过热处理结合茎尖培养的方式进行脱毒，即将含有新生芽点的瓶苗置于温度为25~35℃、光照条件为1500~2500lux、光照周期为4h/d的人工气候箱内培养3~6周，然后取出切取茎尖1mm，重复上述增殖培养过程，获得小鳞茎；

（4）生根诱导，在激素比例和糖含量为：1/2MS+IBA0~3.0mg/L+NAA0~1.0mg/L +糖30~60g/L+琼脂6~8g/L+活性炭1~2g/L，培养条件为：pH=5.5~6.5，光照为1500~2500lux，光照周期为8h/d，温度为18~22℃的条件下进行生根培养，生根率达到30%~85%。

本发明要解决的技术问题：

本发明主要解决川贝母组的无病毒组培苗培育技术问题，包括种源的选择，组培技术和种苗脱毒三方面。

1.种源-2010年版的《中国药典》规定川贝母的来源为6种，分别是川贝母、暗紫贝母、甘肃贝母、梭砂贝母、太白贝母、瓦布贝母的干燥鳞茎。

1.1几种药用川贝母差异表现

表1.为常用药用川贝母差异表现

药典规定的药用川贝母来源为6种，但野生川贝母主要由上述三种构成，其余三种梭砂贝母、太白贝母、瓦布贝母在野生的松贝中占比例较小，不予考虑，由上表可知，暗紫贝母单粒质量较重，产量高，组培难度相对容易，花色一致性好，适于商业开发。

1.2几种药用川贝母生物碱含量测定