[发明专利]抗人DLL4单克隆抗体3F9

说明书

本发明公开了抗人DLL4单克隆抗体3F9，由杂交瘤细胞株分泌得到，杂交瘤细胞株保藏信息为：保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏时间：2017年6月7日；保藏号：CGMCC No.14283；分类命名：分泌抗人DLL4分子单克隆抗体杂交瘤细胞株3F9。本发明的单克隆抗体3F9与DC的结合与商品化的克隆MHD4‑46相比并不会阻断DLL4+DC诱导Naïve T cells向Th1方向分化的能力。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体，具体涉及抗人DLL4单克隆抗体3F9。

背景技术

Notch信号通路是进化上高度保守的一套信号系统，在细胞增殖、分化和凋亡，以及细胞生长和各种生理功能中均发挥重要作用。Notch信号分子在绝大多数的多细胞生物体内表达。哺乳动物主要表达四种Notch受体（分别为：Notch1、2、3、4）和五种Notch配体（分别为：DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1和Jagged2）。

早期研究显示，DLL4在血管内皮细胞内高度选择性表达，对于调控内皮细胞发育至关重要。2004年Amsen及其同事发现通过LPS刺激包含有抗原递呈细胞的骨髓细胞可以诱导DLL4的表达。2007年，Skokos及其同事报道，CD8-DC通过DLL4分子激活Notch信号通路的方式可以诱导细胞向Th1方向分化，而这种方式是非IL-12依赖性的。随后有研究表明，在实验小鼠模型中，DLL4可以调控许多疾病的发病，例如炎症性疾病、呼吸道病毒感染、实验性过敏性结肠炎、实验性自身免疫性脑脊髓炎以及分支杆菌引起的肺肉芽肿。Zhang Yi教授的研究证实了表达DLL4的小鼠树突状细胞（dendritic cell, DCs）可以提高自身反应性T细胞的应答并介导移植物抗宿主反应。但是对人DLL4+ DCs的研究还有待进一步开展。

最近，Zhang Yi教授等人的研究报道了人DLL4+ DCs在调节T细胞向Th1和Th17分化中的关键作用。来自于健康人的外周血中的CD1C+ DCs和浆细胞样DC（pDC）表面不表达DLL4分子。相比之下，进行同种异体造血干细胞移植的患者外周血中的DLL4+ CD1C+ DCs表达的DLL4 mRNA水平比健康人高16倍。在激活TLR信号后，来自于健康人的CD1C+ DCs表达的DLL4水平显著上调。相比之下pDCs上调的程度较低。活化后的DLL4+ DCs比未刺激的DCs能够更好地促进Th1和Th17分化。在DLL4+ DCs刺激活化T细胞的过程中，使用DLL4的中和抗体来阻断Notch信号，可以减少Th1和Th17细胞的产生。因此对于人外周血循环的DCs来说，DLL4是其诱导T细胞向Th1和Th17分化的一个重要功能性分子。这些发现为人类炎症性疾病的治疗和干预提供了可能的途径。

DLL4分子自被发现以来一直被广大科研工作者所关注，针对人DLL4分子也展开了许多方面的功能性研究。在许多功能性研究中，需要通过抗体标记后使用流式细胞仪将DLL4+的目的细胞分选出来。但目前使用的商品化抗人DLL4单克隆抗体还存在一定的局限性。目前许多知名抗体公司用于流式检测的抗人DLL4荧光抗体仅有一个克隆号（MHD4-46），而该克隆号的抗体在Zhang Yi教授发表的文献中明确报道了其具有阻断DLL4信号的功能。目前并没有一株商品化的单克隆抗体可用于标记并通过流式细胞仪分选出DLL4+ DCs的同时保留DLL4的信号功能。因此，研制抗人DLL4+功能性单克隆抗体将有助于更好的研究DLL4分子的生物学功能，为研究提供一种新的手段。

发明内容

本发明的发明目的是提供一种抗人DLL4单克隆抗体3F9以及能产生所述抗人DLL4单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.14283。

本发明公开的杂交瘤细胞株的制备方法包括以下步骤：