[发明专利]一种用于培养脂肪间充质干细胞的培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于培养脂肪间充质干细胞的培养基及其应用。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stromal/stem cells,MSCs)是一种来源于发育早期中胚层的多能干细胞，广泛存在于各种机体组织如“骨髓”、“脂肪”、“脐带”、“胎盘”、“羊膜”等，并且具有自我更新能力和多向分化潜能，以及独特的细胞因子分泌功能。在不同的诱导条件下可分化为骨、软骨、脂肪、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻后仍具有多向分化潜能。实验研究发现，与骨髓间充质干细胞相比，脂肪干细胞具有来源充足、取材方便、可反复取材，对人体造成的创伤较小，且脂肪组织中所含干细胞数量不会随着患者年龄的增加而减少等优势，因此，脂肪间充质干细胞可能替代骨髓间充质干细胞成为新的组织种子细胞的来源。

目前，现有技术尚无较为成熟的关于脂肪间充质干细胞的大规模培养方法。在国内外对于间充质干细胞的常规培养体系中主要通过采用常规基础培养基添加一定浓度的胎牛血清(FBS)以达到扩大培养的目的。然而动物血清中含促进生长的活性成分和抑制生长的成分，且本身可能携带细菌、病毒、蛋白传染性疾病；此外血清中蛋白含量高，成分复杂，FBS应用中存在批间差异，需要大量的验证工作。鉴于此，目前已有一些公司研发出新一代无血清培养基，然而现有市售的无血清培养基存在化学成分不稳定、难以保证培养基批次间的一致性、细胞增值速率不高以及价格昂贵等问题。此外，间充质干细胞在培养传代次到5～6代之后，细胞形态易发生改变，部分细胞会出现老化现象。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于细胞培养的无血清培养基。

本发明提供的用于细胞培养的无血清培养基包括人胰岛素、人血清白蛋白、转铁蛋白、纤维连接蛋白、抗坏血酸、生物素、血小板衍生生长因子(PDGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)和转化生长因子-β(TGF-β)。

上述无血清培养基中，所述无血清培养基由基础培养基、所述人胰岛素、所述人血清白蛋白、所述转铁蛋白、所述纤维连接蛋白、所述抗坏血酸、所述生物素、所述血小板衍生生长因子、所述碱性成纤维生长因子和所述转化生长因子-β组成。

上述无血清培养基中，所述基础培养基为培养动物细胞的培养基，具体可为a-MEM、DMEM、DMEM-F12、M199、IMDM或IMDM/F12；优选为a-MEM培养基，a-MEM培养基既可以为细胞生长提供充足的营养物质，亦可以有效降低成本。

上述无血清培养基中，所述人胰岛素在所述无血清培养基中的浓度为(2～10)μg/mL；

所述人血清白蛋白在所述无血清培养基中的浓度为(0.1～1)mg/mL；

所述转铁蛋白在所述无血清培养基中的浓度为(2～10)μg/mL；

所述纤维连接蛋白在所述无血清培养基中的浓度为(1～10)ng/mL；

所述抗坏血酸在所述无血清培养基中的浓度为(1～10)μg/mL；

所述生物素在所述无血清培养基中的浓度为(1～5)μg/mL；

所述血小板衍生生长因子在所述无血清培养基中的浓度为(1～5)ng/mL；

所述碱性成纤维生长因子在所述无血清培养基中的浓度为(1～5)ng/mL；

所述转化生长因子-β在所述无血清培养基中的浓度为(1～5)ng/mL。

上述无血清培养基中，所述人胰岛素在所述无血清培养基中的浓度为5μg/mL；

所述人血清白蛋白在所述无血清培养基中的浓度为0.5mg/mL；

所述转铁蛋白在所述无血清培养基中的浓度为5μg/mL；

所述纤维连接蛋白在所述无血清培养基中的浓度为5ng/mL；

所述抗坏血酸在所述无血清培养基中的浓度为5μg/mL；

所述生物素在所述无血清培养基中的浓度为3μg/mL；

所述血小板衍生生长因子在所述无血清培养基中的浓度为5ng/mL；

所述碱性成纤维生长因子在所述无血清培养基中的浓度为5ng/mL；

所述转化生长因子-β在所述无血清培养基中的浓度为5ng/mL。

上述无血清培养基中，所述人胰岛素为重组人胰岛素。

本发明的另一个目的是提供上述无血清培养基的新用途。

本发明提供了上述无血清培养基在细胞体外扩增培养中的应用。

本发明还提供了上述无血清培养基在提高细胞增殖能力中的应用。