[发明专利]能扩宽HCG检测范围的免疫胶体金检测装置及检测方法

权利要求书

1.一种扩宽HCG免疫胶体金检测范围的检测装置，其特征在于：包括HCG检测试纸，所述HCG检测试纸包括含有胶体金标记HCG抗体的胶体金垫和NC膜，所述NC膜上包被有配对HCG抗体作为T线、抗鼠IgG作为C线。

2.根据权利要求1所述扩宽HCG免疫胶体金检测范围的检测装置，其特征在于：所述NC膜是一种由硝酸纤维素构成的多孔结构的膜，孔径为8-15um。

3.根据权利要求1所述的扩宽HCG免疫胶体金检测范围的检测装置，其特征在于：所述NC膜是由下述方法制备得到的：以0.01M pH 7.4磷酸盐缓冲液(PBS)将配对的HCG抗体配制成0.8-1.5mg/mL，用喷膜仪在NC膜上以1.2-1.4ul/cm的参数进行划线，包被T线，同时在NC膜上包被1-2mg/ml的抗鼠IgG作为C线，干燥，即得。

4.根据权利要求1所述的扩宽HCG免疫胶体金检测范围的检测装置，其特征在于：所述胶体金垫是由下述方法制备得到的：采用氯金酸－柠檬酸三钠法制备直径为40±5nm的胶体金溶液，取胶体金溶液，用0.2M K₂CO₃将溶液调到pH7.0-pH8.0，然后将胶体金缓慢搅拌，按每1ml溶液加入5ug-10ug将HCG标记抗体加入到溶液中，继续搅拌30分钟，再加入到终浓度为0.5％的PEG2000和0.5％的水解酪蛋白进行封闭，标记结束后以12000rpm离心，弃上清，沉淀按60％原体积复溶至不同配比的胶体金工作液中(0.1MTris/HCl缓冲液，pH7.5，含0.2％水解酪蛋白，6％蔗糖，0.5％Tween 20)。然后将标记胶体金溶液按1ml溶液铺20cm²的比例加样于无纺布上，在温度20-25℃，相对湿度在＜30％的干燥间干燥3-5小时，制成胶体金垫。

5.根据权利要求1所述的扩宽HCG免疫胶体金检测范围的检测装置，其特征在于：所述HCG检测试纸由胶体金垫、NC膜、样品垫、吸样垫和塑料底板组成，所述样品垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从塑料底板一端依次排列至另一端。

6.根据权利要求5所述的扩宽HCG免疫胶体金检测范围的检测装置，其特征在于：所述样品垫为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫为吸水滤纸。

7.根据权利要求1所述的扩宽HCG免疫胶体金检测范围的检测装置，其特征在于：所述HCG检测试纸的宽度为3-5mm，长度为7-8cm。

8.优选的，上述扩宽HCG免疫胶体金检测范围的检测装置，包括HCG检测试纸、卡壳和免疫层析判读结果记录仪，所述卡壳包含上盖和下盖两个部分，所述卡壳下盖内部平行放置所述HCG检测试纸组成检测卡，所述卡壳上盖一侧对应HCG检测试纸的样品垫部分设置了样品孔和稀释液孔，用于加入样本和稀释液，卡壳上盖的中间部分应对试纸NC膜中部设置了视窗口，用于观察NC膜上的C、T线，并判定结果，所述免疫层析判读结果记录仪内置了是否发生钩状效应的判定方法和对应区域(未发生钩状效应区域和发生钩状效应区域)的相应标准曲线，所述检测卡与该免疫层析判读结果记录仪配合使用，用于对检测结果的定量判定，对HCG检测范围为10-1600000/mL。

9.一种应用上述免疫胶体金检测装置的HCG检测方法，检测时将被检样本(如5μl血清、血浆或10μl全血样本)加入到样本孔中，然后在稀释液孔中加入70ul样品稀释液(PBS)，在15-20分钟内，用免疫层析结果判读记录仪对检测结果进行判定。

10.优选的，上述HCG检测方法，所述免疫层析结果判读记录仪的判断方法如下：分别在t0.5和t时间时使用免疫层析判读记录仪测定胶体金测试条的反应线(T线)的信号值GOD0.5和GOD值，t表示完全反应的时间，t0.5表示完全反应时信号值一半的时间，当GOD/GOD0.5>1.5时判定为未出现钩状效应，按直线回归方程对检测结果的信号值进行浓度值计算，当GOD/GOD0.5<1.5时判定为出现钩状效应，按照logistic曲线拟合四参数法方程对检测结果的信号值进行浓度值的计算。