[发明专利]一种无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法在审
| 申请号： | 201710652407.6 | 申请日： | 2017-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN107267468A | 公开（公告）日： | 2017-10-20 |
| 发明（设计）人： | 曾光志;吴越;曾衍华;万成燕;吕亮 | 申请（专利权）人： | 华派生物工程集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N1/36 |
| 代理公司： | 成都正华专利代理事务所(普通合伙)51229 | 代理人： | 李林合,李蕊 |
| 地址： | 641400 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血清 悬浮 培养 狂犬病毒 方法 | ||
1.一种无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)种子细胞活化
将液氮冻存的种子细胞先用血清含量为8％的培养基培养3代后，然后用血清含量为5％的培养基培养3代，再用血清含量为2％的培养基培养3代；
(2)种子细胞的无血清驯化
将培养基中血清含量从2％降低至1％，培养至连续3天种子细胞活力均高于90％，将血清含量降低至0.5％，培养至连续3天种子细胞活力均高于90％，将血清含量降低至0.2％，培养至连续3天种子细胞活力均高于90％，将血清含量降低至0，传代培养，每代培养72h，培养至连续3天种子细胞活力均高于90％，停止驯化；
(3)在生物反应器中培养
将驯化后的种子细胞置于生物反应器中培养，培养3-6天；
(4)伪狂犬病毒的增殖
将伪狂犬病毒接种于生长良好的ST单层种子细胞进行培养，培养温度为37℃，培养时间为24-48h，待病变达到80％以上时，收获伪狂犬病毒液；
(5)接种病毒
当生物反应器中种子细胞密度达到7.0×106cell/ml以上时，按MOI＝0.5-2接种步骤(4)获得的伪狂犬病毒液；
(6)病毒规模化培养
将步骤(5)所得混合物置于生物反应器中培养，培养至细胞病变≥60％且溶氧曲线保持稳定状态时，收获病毒液，于-80℃保存。
2.根据权利要求1所述的无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法，其特征在于，种子细胞为BHK21。
3.根据权利要求1所述的无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法，其特征在于，步骤(2)驯化得到的种子细胞活力高于90％。
4.根据权利要求1所述的无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法，其特征在于，步骤(3)中驯化后的种子细胞初始密度为6×105cell/ml。
5.根据权利要求1所述的无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法，其特征在于，步骤(3)中培养温度为37℃，转速为40r/min，溶氧为40-50％，pH值为7.1-7.3。
6.根据权利要求1所述的无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法，其特征在于，步骤(5)中按MOI＝1接种步骤(4)获得的伪狂犬病毒液。
7.根据权利要求1所述的无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法，其特征在于，步骤(6)中培养温度为36±0.5℃，转速为15r/min，溶氧为40-50％，pH值为7.2-7.4。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于华派生物工程集团有限公司，未经华派生物工程集团有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710652407.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
