[发明专利]一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法

说明书

本发明涉及文物检测领域，公开了一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法，先对棉纤维素脱脂，经乙酸和氢氧化钠处理除去木质素和半纤维素后，利用纤维素酶和β‑葡萄糖苷酶对纤维素进行酶解，再配制去离子水‑硫酸铵‑聚乙二醇‑400萃取液，将萃取后的上下层液相分别冷冻干燥，上层得到回收的酶，下层得到葡萄糖粉末，将葡萄糖粉末和牛血清蛋白溶于去离子水和溴化钾溶液，并在恒温恒湿箱中放置，然后冷冻干燥得到葡萄糖‑牛血清蛋白偶联物。利用本发明提供的方法得到的偶联大分子较稳定，以这种偶联大分子为完全抗原，对动物进行免疫注射，即可得到相对应的特异性抗体，为鉴定古代纺织品文物中的棉类织物提供了可行性。

技术领域

本发明涉及文物检测领域，尤其涉及一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法。

背景技术

近年来我国出土了大量纺织品文物，鉴定其所属种类对研究我国的历史文化具有重大意义。对于丝织品的鉴定目前已经出现了数种比较精确灵敏的方法，其中又以酶联免疫吸附测定、Western Blotting为代表，它们大多建立在抗原与对应的抗体之间会发生特异性结合这一免疫学基本知识上。由于蚕丝本身含有大量蛋白质，所以利用蚕丝丝素蛋白作为完全抗原对动物进行免疫注射，经过相应处理即可获得能与丝素蛋白特异性结合的抗体，利用这些抗体就可以检测古代纺织品中是否含有蚕丝。但是棉纤维的主要成分是纤维素，无法直接作为完全抗原来进行动物免疫，因此难以利用酶联免疫吸附测定、WesternBlotting等方法对古代纺织品文物中的棉织物进行鉴定。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法。本发明通过一系列处理将棉纤维素的酶解产物葡萄糖与生物大分子偶联形成偶联大分子。以这种偶联大分子为完全抗原，对动物进行免疫注射，即可得到相对应的特异性抗体，本发明以开创性地将纤维素产物与蛋白偶联，为鉴定古代纺织品文物中的棉类织物提供了可行性。

本发明的具体技术方案为：一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法，以g、mL计，包括以下步骤：

1）取9-11 g棉纤维，研磨成粉，加入45-55 mL苯，20-30 mL乙醇浸泡处理，对纤维进行脱脂处理，处理结束后对混合溶液进行减压蒸发以回收苯和乙醇，脱脂后的棉纤维用去离子水冲洗，烘干后得到棉纤维粉末。

2）取4-6g烘干后的棉纤维粉末，加入180-220 mL的4-6wt%乙酸，在70-80 ℃的水浴中加热10-14 h后抽滤，取沉淀，用去离子水洗涤后加入180-220mL的7-9wt%的氢氧化钠，在70-80℃的水浴中加热10-14 h后抽滤，将沉淀用去离子水冲洗。

3）取步骤2）中所得沉淀，加入浓度为8-12wt%过氧化氢溶液，在40-50℃水浴中加热4-6h后抽滤，将沉淀用去离子水冲洗，烘干后得到纤维素粉末。

4）取2-3g纤维素粉末，加入70-80mL去离子水，称量0.4-0.6 g的纤维素酶和0.1-0.3 g的β-葡萄糖苷酶加入至溶液中后调节pH为4-5，进行酶解反应7-9h。

本发明利用复合酶对纤维素进行处理可以加快酶解的速度，缩短工艺流程，同时也能提高酶解的程度，增加产率。

5）移取8-12 mL聚乙二醇-400至烧杯中，接着加入4-6 mL去离子水，最后加入8-12mL预先配好的30wt%硫酸铵溶液，搅拌均匀后于1-5 ℃下储存，制得萃取液。

6）酶解反应结束后，在剩余溶液中加入20-30mL萃取液，搅拌混合均匀后置于1-5℃环境中7-9h，然后对溶液进行离心处理，离心后溶液分层，分别收集上下层液相进行真空冷冻干燥，上层有机相冻干后得到酶，可以重复利用，下层溶液冻干后得到葡萄糖粉末。