[发明专利]一种用于CIK细胞于-80℃直接冻存的冻存液

说明书

本发明公开了一种用于CIK细胞于‑80℃直接冻存的冻存液，该冻存液以RPMI‑1640培养液为基质，在基质中添加DMSO、FBS复配而成，基质中还添加有效量的人β2‑微球蛋白。使用本发明提供的细胞冻存液冻存CIK细胞时，可以直接于‑80℃冻存，且不会导致CIK细胞杀伤力明显降低，可以简化CIK细胞低温冻存工艺。

技术领域

本发明属于细胞冻存领域，具体涉及一种用于CIK细胞于-80℃直接冻存的冻存液。

背景技术

冻存CIK细胞时，一般降温程序为：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，最后转至-80℃低温冰箱放置(或用液氮保存)，程序繁琐。但是，若直接将CIK细胞转至-80℃低温冰箱保存，会显著降低CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性【参考文献：-80℃冰箱直接冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤活性的影响，细胞与分子免疫学杂志，2012，28(10)】。

这主要与细胞冻存液有关，现有冻存液不适合用作CIK细胞于-80℃直接冻存的保护剂。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，简化CIK细胞低温冻存工艺，提供一种用于CIK细胞于-80℃直接冻存的冻存液。

本发明通过如下技术方案得以实现：

一种细胞冻存液，以RPMI-1640培养液为基质，在基质中添加DMSO、FBS复配而成，基质中还添加有效量的人β2-微球蛋白。

优选地，1L基质添加1-2g人β2-微球蛋白。

优选地，1L基质添加80-120mLDMSO。

优选地，1L基质添加180-220mLFBS。

上述细胞冻存液在CIK细胞冻存方面的应用。

本发明优点：

使用本发明提供的细胞冻存液冻存CIK细胞时，可以直接于-80℃冻存，且不会导致CIK细胞杀伤力明显降低，可以简化CIK细胞低温冻存工艺。

附图说明

图1为不同CIK细胞对K562细胞的杀伤率(％)。

具体实施方式

为了更好地解释本发明的技术方案，下面结合具体实施例进一步介绍。实施例中未特别强调的实验材料均为常规实验材料，属于本领域技术人员易于获得的范畴。

实施例1

一、实验材料和方法

1、细胞冻存液的配制

在RPMI-1640培养液(美国Gibco公司)中添加二甲基亚砜(DMSO)、胎牛血清(FBS，美国Gibco公司)和人β2-微球蛋白(购于武汉戴安生物技术有限公司，货号P0008)，其中：1LRPMI-1640培养液中分别添加1.5g人β2-微球蛋白、100mL DMSO、200mLFBS。混合均匀后于4℃低温保存，使用前取出并轻轻摇匀。

另按照常规配方配制对比冻存液，对比冻存液的成分为含10％DMSO及20％FBS的RPMI-1640作为冻存剂。

2、CIK细胞的培养扩增