[发明专利]一种高效石斑鱼精子冷冻保存液及其使用方法

说明书

本发明公开了一种高效石斑鱼精子冷冻保存液及其使用方法，属于鱼类种质冷冻保存的技术领域。本发明包括稀释液和抗冻剂；所述稀释液为水溶液，所述稀释液中含有以下质量浓度的组分：葡萄糖10～20g/L、氯化钠7.5～8.5g/L、氯化钾0.6～0.7g/L；所述抗冻剂为1,2‑丙二醇，所述抗冻剂在所述保存液中的体积浓度为10～20％。本发明还给出上述保存液保存石斑鱼精子的使用方法，经过稀释液配制、抗冻剂配制、保存液预冷、精液稀释、平衡和分装、冷冻保存、解冻和受精七个步骤而完成。本发明的保存液成份简单，毒性低，易于配制，养殖技术人员容易掌握，冷冻活力高，具有广泛的通用性，提高了石斑鱼精子冷冻保存成活率。

技术领域

本发明属于鱼类种质保存的技术领域，特别是指一种高效石斑鱼精子冷冻保存液及其使用方法。

背景技术

石斑鱼(Epinephelus)是我国重要的海水养殖经济鱼类和优良种质资源，在我国有36种石斑鱼，主要分布在东海和南海。2015年石斑鱼捕捞量达117593吨，养殖量达100006吨，对于蓝色农业发展具有重要的作用。由于石斑鱼是一类雌雄同体、雌性先熟的鱼类，在同一生态群体中雄性数量相当少，在石斑鱼的人工繁殖中很难获得雄鱼的精子；另一方面随着石斑鱼产业的迅速发展，以及养殖品种出现病害多、畸形率高等问题，养殖企业急需培育出具有优良养殖性状的新品种来提高养殖产量和效益。建立石斑鱼精子库可以将分布于不同地域、不同繁殖时间的各种石斑鱼种质冷冻保存起来，利用不同品种在生长、抗病等方面的性状进行远缘杂交育种，培育生产中急需的养殖新品种，因此研究石斑鱼精子冷冻保存技术具有重要的意义。

石斑鱼种繁多，例如：鞍带石斑鱼、七带石斑鱼、云纹石斑鱼、棕点石斑鱼、褐石斑鱼、金钱石斑鱼、清水石斑鱼等，每一种鱼在生态分布、生理和繁殖习性等方面都具有各自的特点，不同鱼类精子生理特点也不同，因此，在石斑鱼精子冷冻保存中需要针对性的研制各种精子稀释液和冷冻剂。目前，现有的石斑鱼精子冷冻保存液只能用于特定的、单一石斑鱼品种精子的冷冻保存，冷冻保存精子活力较低，活力平均在65％左右，不具有广普性，通用性差；而且，精子稀释液成份比较复杂，成本较高，养殖企业的一般技术人员难于掌握，往往在配制和精子冷冻保存中出现误差，导致冷冻精子的成活率较低，给石斑鱼精子冷冻保存及精子冷冻库的建立增加了实际困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效石斑鱼精子冷冻保存液及其使用方法，解决了现有技术中石斑鱼精子冷冻保存液存在通用性差、成分复杂和成活率低的问题。

本发明的一种高效石斑鱼精子冷冻保存液，其主要是通过以下技术方案加以实现的：包括稀释液和抗冻剂；所述稀释液为水溶液，所述稀释液中含有以下质量浓度的组分：葡萄糖10～20g/L、氯化钠7.5～8.5g/L、氯化钾0.6～0.7g/L；所述抗冻剂为1,2-丙二醇，所述抗冻剂在所述保存液中的体积浓度为10～20％。

本发明的石斑鱼精子冷冻保存液具有成份简单、毒性低、易于配制和冷冻活力高的特点，解决了现有石斑鱼精子冷冻保存液成份多、毒性高、配制和保存方法复杂，养殖技术人员难于掌握的问题；本发明的石斑鱼精子冷冻保存液具有广泛的通用性，可以广泛用于鞍带石斑鱼、七带石斑鱼、云纹石斑鱼、棕点石斑鱼、褐石斑鱼、金钱石斑鱼和清水石斑鱼等各类石斑鱼的精子冷冻保存，提高了石斑鱼精子冷冻保存成活率；本发明的精子冷冻保存液使用了毒性较低的1,2-丙二醇(PG)，极大降低了对精子细胞结构和遗传物质的损伤，提高了冷冻精子的成活率和受精率，也可降低对操作人员的伤害及对养殖环境的污染，达到了环保作用，为石斑鱼精子冷冻库的建立提供了一种高效的技术方法。

作为一种优选的实施方案，所述稀释液中含有以下质量浓度的组分：葡萄糖15g/L、氯化钠8g/L、氯化钾0.65g/L。本发明的稀释液含有三种物质，其成份少，浓度适宜，配制方便，不会对精子的细胞结构和遗传物质造成损伤，广泛用于各类石斑鱼精子的冷冻保存，提高了冷冻精子的成活率和受精率。