[发明专利]一种测定毛发中吡咯加合物含量的方法有效
| 申请号： | 201710590747.0 | 申请日： | 2017-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN107490504B | 公开（公告）日： | 2019-05-14 |
| 发明（设计）人： | 谢克勤;黎显杰 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N21/31 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 王志坤 |
| 地址： | 250101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 毛发 加合物 吡咯 消化 标准曲线 定量测定 二甲氨基 慢性中毒 水浴加热 苯甲醛 检出限 浓盐酸 消解液 正己烷 二酮 混匀 可用 胰酶 加热 溶解 蛋白 筛选 | ||
1.一种测定毛发中吡咯加合物含量的方法，其特征在于，步骤如下：
(1)处理毛发样品得毛发样品消解液；所述毛发的处理方法为：
A.毛发样品的前处理
将毛发样品与清洁剂和热水混匀并搅拌，再用无水乙醇浸泡脱脂处理，静置室温干燥；
B.消化处理
向前处理后的毛发样品中加入NaOH溶液，混匀，水浴加热溶解，然后调至pH＝8；再加入胰酶溶液继续加热消化0.5-1.5h，得毛发样品消解液；
(2)将毛发样品消解液离心，取上清中间液，加入盐酸胍、无水乙醇和埃利希试剂，震荡后测定吸光度值，利用内标工作曲线测定毛发样品消解液中吡咯加合物浓度；
(3)测定毛发样品消解液中蛋白质的含量；
(4)按C3＝C1/C2nmol/mg计算毛发样品中吡咯加合物的含量；
其中，C1为毛发样品消解液中吡咯加合物浓度，计算方法为：C1＝(OD1-0.0612)/0.0048nmol/ml；OD1为毛发样品消解液在526nm处测定的吸光值；
C2为毛发样品消解液中蛋白质浓度，计算方法为：C2＝(OD2-0.158)/0.0011*10/1000mg/ml；OD2为毛发样品消解液在562nm处测定的吸光值；
C3为毛发样品中吡咯加合物的含量。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，上清中间液、盐酸胍、无水乙醇和埃利希试剂加入的体积比为1：1：1：1。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，毛发样品消解液中蛋白质含量的测定方法为：将毛发样品消解液用水稀释10倍，得稀释液；用牛血清白蛋白配制系列蛋白标准溶液，取各浓度的蛋白标准溶液和稀释液加入BCA试剂盒AB混合液，在37℃震荡孵育30min，测定562nm吸光度值，根据标准曲线，计算毛发样品消解液中蛋白质浓度。
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