[发明专利]一组生物合成创新霉素或开环创新霉素的基因簇

权利要求书

1.一种创新霉素(chuangxinmycin)和/或开环创新霉素(secochuangxinmycin)的生物合成的基因簇，其特征在于，所述的基因簇依次包含cxnA、cxnB、cxnC、cxnD、cxnE、cxnF、cxnT、cxnR、trpRS九个关键功能基因，以及在创新霉素分子中引入S元素所必需的thiG、moeZ基因，其核苷酸序列分别为如SEQ ID No.2～12所示，包含cxnA、cxnB、cxnC、cxnD、cxnE、cxnF、cxnT、cxnR、trpRS九个关键功能基因的基因片段序列如SEQ ID No.1所示，

所述的生物合成基因簇中的各个基因所编码蛋白的具体功能为：

(1)CxnA为依赖于维生素B12的自由基S-腺苷甲硫氨酸家族的C-甲基转移酶，其功能为将吲哚丙酮酸的3-位甲基化，生成3-甲基吲哚丙酮酸；

(2)CxnB为氨基转移酶，其功能为将创新霉素的生物合成前体色氨酸中的氨基转变为酮基，形成吲哚丙酮酸；

(3)CxnC为还原酶，其功能为将3-甲基吲哚丙酮酸的酮基还原为羟基，形成3-吲哚-2-羟基丁酸；

(4)CxnD为细胞色素P450酶，其功能为催化开环创新霉素中的S原子和C原子形成C-S键，生成CM；

(5)CxnE为硫载体蛋白，在JAMM金属蛋白酶家族的CxnF的作用下，C-末端10个氨基酸残基被水解露出双甘氨酸基序，而后先在SCP活化蛋白MoeZ作用下生成腺苷酰化的SCP，再在MoeZ的C-端硫氰酸酶结构域的作用下形成硫醇化的SCP，即为硫原子的供体；

(6)CxnF为JAMM金属蛋白酶家族成员，其功能为酶切CxnE的C-末端10个氨基酸残基，露出双甘氨酸基序；

(7)CxnR为转录调控蛋白，其功能为调节所述基因簇的表达；

(8)CxnT为创新霉素的转运蛋白；

(9)TrpRS为色氨酸tRNA合成酶，是创新霉素的自身抗性基因；

(10)ThiG为噻唑合成酶，其功能为将还原酶CxnC催化形成的3-吲哚-2-羟基丁酸中的羟基替换为由硫醇化SCP提供的巯基，得到3-吲哚-2-巯基丁酸；

(11)MoeZ为SCP活化蛋白，其作用为活化SCP蛋白CxnE，形成硫代羧酸酯，即硫醇化的SCP。

2.权利要求1所述的基因簇中的十一个关键基因编码的蛋白质。

3.包含权利要求1所述的开环创新霉素或创新霉素基因簇的重组载体，所述的重组载体为包含酵母菌元件ARSH4/CEN6复制子和TRP1筛选标记、大肠杆菌元件pUCori复制子和链霉菌元件整合酶及其整合位点attP、DNA接合转移起始位点oriT的重组载体。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述的重组载体为pCAP01。