[发明专利]一种采用荧光光谱法研究稀土金属La3+与BSA的相互作用的方法

说明书

技术领域

本发明属于荧光光谱技术领域，具体涉及一种采用荧光光谱法研究稀土金属La³⁺与BSA 的相互作用的方法。

背景技术

血清白蛋白是血浆中含量最为丰富的蛋白质，与其它蛋白质相比，血清白蛋白分子量较小、稳定性较好、溶解性较大、与各种配体都具有较好的亲和性，是各种内源性和外源性物质运输和排出体外的主要载体。近年来，随着稀土在工农业领域的广泛应用，稀土离子通过各种途径进入生物体，与体内血清白蛋白相互作用，影响和改变蛋白质分子固有的结构和功能。

对稀土金属离子与血清白蛋白的相互作用，国内许多学者进行了研究，以期解决稀土金属离子在人体中有无积累，对人体有利还是有害等科学问题。例如，李晓晶等[李晓晶,张善荣,张树功,等.稀土离子(Ⅲ)与牛血清白蛋白结合作用的研究[J].高等学校化学学报, 1999,20(1):127-131]通过平衡透析法确定Pr³⁺与牛血清白蛋白(BSA)结合的低亲和位点数大于6，高亲和位点数为2。秦身钧等[秦身钧,申金山,李艳廷,等.稀土金属离子及pH诱导牛血清白蛋白构象变化的同步荧光光谱研究[J].中国稀土学报,2004,22(3):393-397]发现BSA荧光猝灭程度随稀土原子序号的增大而增强。吴锦绣等[吴锦绣,李梅,宋玉民,等.Ce³⁺与牛血清白蛋白的相互作用的研究[J].过程工程学报,2010,10(6):1126-1131.//吴锦绣,李梅,柳召刚,等.光谱法研究稀土离子钇(Ⅲ)与牛血清白蛋白的相互作用[J].发光学报,2012,33(10):1153-1159]研究了Ce³⁺和Y³⁺对BSA的作用，得到Ce³⁺和Y³⁺对BSA的荧光猝灭作用是属于生成复合物的静态猝灭。林燕等[林燕,赖晓琦,李蕾.稀土离子(Ⅲ)与牛血清白蛋白结合作用的荧光光谱分析[J]. 赣南师范学院学报,2001,10(6):45-48.]采用荧光谱测出了Sm³⁺和Eu³⁺与BSA结合的配位比分别为2.5:1和2.75:1。邓凡政实验研究了Sm³⁺和人血清白蛋白(HSA)的相互作用，表明 Sm³⁺和HSA有很强的结合作用，并且Sm³⁺对HSA的荧光猝灭是静态猝灭。上述文献可以看出，学者对稀土金属离子与血清白蛋白的结合常数、猝灭作用和类型、配位比等进行了研究，但研究La³⁺与BSA的相互作用的文献并未见报道。

本发明公开了一种采用荧光光谱法研究稀土金属La³⁺与BSA的相互作用的方法，从而探讨不同浓度La³⁺与pH值对BSA荧光光谱的影响，La³⁺对BSA的猝灭类型、结合常数、结合位点数，为稀土金属离子在体内的代谢过程及作用机理提供理论参考。

发明内容

本发明目的在于提供了一种采用荧光光谱法研究稀土金属La³⁺与BSA的相互作用的方法。

基于上述目的，本发明采取了如下技术方案：

一种采用荧光光谱法研究稀土金属La³⁺与BSA的相互作用的方法，包括以下步骤：

1)配制8×10^-6mol/L的BSA；

2)配制不同pH值的Tris-HCl缓冲溶液:先配制三份0.1mol/L的Tris溶液，每份Tris 溶液的体积≥120mL；分别添加6mol/L的盐酸溶液配制得到pH值分别为6.5、7.5、8.5的 Tris-HCl缓冲溶液；

3)配制1×10^-2mol/L的La³⁺标准溶液；

4)测试其荧光发射光谱：取6支10mL刻度比色管，加入2.0mL，8×10^-6mol/L的BSA 溶液和不同体积的La³⁺标准溶液，分三组，分别用pH值为6.5、7.5、8.5的Tris-HCl缓冲溶液定容至10mL刻度线处，以150W氙灯为光源，扫描速度60nm/min，激发狭缝10nm，发射狭缝为5nm，固定激发波长为280nm，记录282-500nm范围的荧光发射光谱。