[发明专利]一种诱导蓖麻花药外植体形成愈伤组织的方法

说明书

本发明公开了一种诱导蓖麻花药外植体形成愈伤组织的方法，包括如下步骤：S1.将蓖麻花药外植体置于15～30 mg/L的BA溶液中浸泡10～20min；S2.将经过S1处理的蓖麻花药外植体接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养，获得愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基为添加了4～16mg/L的SNP的MS培养基，或添加了1～2mg/L铜离子的MS培养基，或添加了3～6mg/L谷氨酰胺的MS培养基。本发明可以促使花药外植体以更高的效率脱分化形成更多的愈伤组织，同时提高了所获得愈伤组织的质量，为蓖麻相关生物技术育种工作奠定了良好的基础。

技术领域

本发明涉及植物细胞工程技术领域，具体地，涉及一种诱导蓖麻花药外植体形成愈伤组织的方法。

背景技术

自从 Guhas首次报道毛蔓陀罗花药培养获得单倍体植株以来，关于花药培养的研究迅速发展，包括中国在内的很多国家相继进行这方面的研究工作，至今已有约200多种作物通过花药培育获得了单倍体植株。

在育种领域，花药培养育种与常规杂交育种、远缘杂交育种、诱变育种以及转基因技术相结合，已经成为生物技术在作物育种中较为广泛和有效的方法之一，是作物改良和遗传学及生理、生化研究的重要方法。到目前为止，我国已有40多种植物用花药培养方法获得了花粉植株，主要有小麦、玉米、水稻、葡萄、柑桔、苹果、龙眼、 橡胶、杨树及人参等一些药用植物。已经培养出80多个水稻花粉新品系和新品种，20多个小麦花粉新品种和新品系。

蓖麻是大戟科蓖麻属一年生或多年生草本植物，是世界上十大油料作物之一，具有用途广泛，经济价值高等特点，是具有特殊工业用途的重要工业油，其籽粒、叶片、茎杆、果壳综合利用价值高。目前，还缺乏有竞争性的优良品种。

长期以来由于蓖麻主要以杂交、选择、引种等传统的方式进行育种，在很大程度上限制了其发展。利用花药培养可以获得单倍体植株，再对其进行染色体加倍后，可快速获得蓖麻育种上广泛应用的纯系品种；并且从中选出的优良纯合系的后代不会发生性状分离，表现整齐一致，可显著缩短育种年限。但是目前，蓖麻花药培养还处于起步阶段，有关蓖麻花药培养的报道还很少，还存在蓖麻花药愈伤组织的诱导率低和愈伤组织质量较差等问题，严重制约了蓖麻花药离体培养的研究进展。因此，建立高效的诱导蓖麻花药外植体形成愈伤组织的组培体系，对加速蓖麻的单倍体育种及进一步发展我国的蓖麻产业都具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种诱导蓖麻花药外植体形成愈伤组织的方法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种诱导蓖麻花药外植体形成愈伤组织的方法，包括如下步骤：

S1.将蓖麻花药外植体置于15～30 mg/L的BA溶液中浸泡10～20min；

S2.将经过S1处理的蓖麻花药外植体接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养，获得愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基为添加了4～16mg/L的SNP的MS培养基，或添加了1～2mg/L 铜离子的MS培养基，或添加了3～6mg/L谷氨酰胺的MS培养基。

传统诱导蓖麻花药外植体形成愈伤组织的方法都是选择将花药外植体接种在含有各种激素的培养基上进行直接诱导，本发明的创造性在于先对花药外植体进行一个前期的浸泡处理，然后再将外植体接种在含铜离子、SNP或谷氨酰胺的培养基上进行诱导愈伤组织。对花药外植体进行前期浸泡处理的好处在于高浓度的BA可以促使花药外植体以更高的效率脱分化形成更多的愈伤组织，同时提高了所获得愈伤组织的质量。

优选地，将蓖麻花药外植体置于15mg/L的BA溶液中浸泡10min。

虽然相同的外植体在不同的培养基上诱导愈伤组织的发生过程基本都是一致的，但其愈伤组织质量和诱导率则因培养基配方的不同而各异；另外，不同的外植体类型在相同的培养基上诱导的愈伤组织的质量和诱导率也是各不相同。