[发明专利]一种离子流色谱的应用

说明书

本发明采用了优选的离子流色谱的应用方法，并在雷公藤9种炮制品的基础上进行分析，开拓了离子流色谱的应用新领域。本发明优化目标明确，工艺条件预测精准，保证提取物中间产品产量、质量稳定一致。

技术领域

本发明属于药物检测领域，具体涉及一种离子流色谱的应用。

背景技术

雷公藤红素是雷公藤的主要成分，是其有效成分也是其毒性成分，在抗肿瘤、免疫抑制、抗炎及神经退行性疾病等领域有良好的作用，课题组前期研究成果显示不同产地雷公藤毒价与其成分相关性，研究结果显示雷公藤红素、雷公藤甲素是造成肝毒性的主要成分，本研究与其实验结果一致。

雷公藤红素和雷公藤甲素既是雷公藤毒性成分，又是其有效成分，并且与剂量有依赖性，在不同剂量范围内表现出不同的作用。

甘草炮制雷公藤后，其成分溶出增多，控制其剂量的同时增强雷公藤活性成分。炮制后雷公藤红素和雷公藤甲素含量升高，但对L02细胞毒性并未增强，原因可能是甘草炮制雷公藤使雷公藤甲素和雷公藤红素含量升高，但并未升高至表现毒性的范围，而是表现出增效的过程，其结果有待于进一步实验验证。

钟丽芳研究发现雷公藤酯甲对Con A和LPS诱导的T淋巴细胞、B淋巴细胞增值有较强的免疫抑制作用。

王晓玉等研究新风胶囊配伍雷公藤后，雷公藤内雷公藤酯甲含量降低，并且未发现雷公藤不良反应，表明其可能与雷公藤毒性有一定的相关性。炮制后雷公藤酯甲含量较炮制前低，且药材细胞抑制率降低，表明雷公藤酯甲可能是引起肝毒性的主要物质，有待后续进一步研究。雷公藤晋碱炮制后含量降低，药材细胞抑制率也降低，考虑其可能与甘草炮制减毒作用相关。

郑幼兰等研究发现雷公藤中雷公藤春碱是一种免疫抑制剂，对体液免疫具有明显的抑制作用，但雷公藤春碱未见肝毒性报道。炮制前后雷公藤春碱含量没有明显改变，考虑其与甘草炮制雷公藤减毒机制无相关性较小。雷公藤次碱具有抗炎效应，炮制后雷公藤次碱含量升高，且抑制率降低，提示甘草炮制雷公藤后可增强雷公藤抗炎效应，进而减轻其引起的肝损伤程度。综上所述，雷公藤晋碱、雷公藤酯甲对甘草炮制雷公藤减毒有较大影响。雷公藤毒性与产地有一定的相关性。

本研究是采用了优选的离子流色谱的应用方法，并在雷公藤9种炮制品的基础上进行分析，开拓了离子流色谱的应用新领域。

发明内容

本发明提供一种离子流色谱的应用，其特征在于：包括如下步骤：

(1)用纯品配制已知浓度的标准液；

(2)制备粗提物，

粗提物的制备方法为

以溶剂、水、甲醇或乙醇萃取新鲜的产品，再浓缩得到粗提物；

将粗提物置于索氏提取器中，依次用石油醚、乙醚和氯仿分别进行回流提取2～3小时，残余物加水溶解过滤去除杂质，并经适当稀释，即得待测样品液，

(3)将标准液进行HPLC-ESI/MS分析，再积分计算得到该标准液的保留时间、质量数，计算提取离子流色谱峰的积分面积，即标准面积A1；

(4)将待测样品液进行同样条件的HPLC-ESI/MS分析，以标准液的保留时间、质量数的对照，再积分计算得到该待测样品保留时间、质量数，提取离子流色谱峰的积分面积，即样品面积A2；

(5)将标准面积A1和样品面积A2进行比较，得出待测样品液中待测物质的含量，计算公式如下

待测样品液中待测物的含量＝标准液中待测物的含量×A2/A1；

(6)根据待测物待测样品液中待测物的含量计算得出待测的产品中的待测物的含量。