[发明专利]用于克隆茶树LOB基因的引物及其克隆方法和应用

说明书

本发明公开用于克隆茶树LOB基因的引物及其克隆方法和应用。根据已知其它物种LOB基因的氨基酸及核苷酸序列设计得到扩增茶树LOB基因保守序列的引物，再根据扩增得到的茶树LOB基因保守序列，扩增茶树LOB基因的5’和3’末端序列，最终首次获得茶树LOB基因全长序列，该基因的核苷酸序列为SEQ ID No.8。通过克隆茶树LOB基因的引物组和克隆方法，它能快速准确地克隆茶树LOB基因的全序列。初步分子鉴定结果表明LOB对儿茶素的合成可能起负调控作用，为后续茶树LOB基因的确切功能和参与的儿茶素代谢调控途径等知识的研究奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是茶树LOB基因、用于克隆茶树LOB 基因的引物及其克隆方法和应用。

背景技术

高等植物的顶端生长以及众多侧生器官的相继分化和发育，是高等植物 最基本的生长发育问题，直接关系到植株各部分器官的组成、个体的大小和 经济价值的高低，因而成为近年来植物功能基因组研究的一个重要热点。

植物的茎尖分生组织(SAM，shoot apical meristem)是位于生长点的一 群细胞，它从胚胎的形态发生之初开始启动，一直维持分生状态并贯穿植物 生长发育的始终。茎尖分生组织的维持需要在中央区茎细胞和周边区生成细 胞之间保持一种平衡，这种平衡的打破往往导致侧生器官原基的启动和形 成。

高等植物的侧枝、叶片、花序、花器官等均为侧生器官。植物的侧生器 官边界区(LATERAL ORGAN BOUNDARIES DOMAIN，LBD)将叶片等侧 生器官(分化细胞)与顶端分生组织(干细胞)分隔开，确保器官的形成和 干细胞的维持。此外，器官边界区产成侧生分生组织，进而形成侧芽，影响 植物株型的建成。LBD基因是最近在高等植物中发现的为植物所特有的一 类新的基因，含有保守的LOB(LATERAL ORGAN BOUNDARIES)结构域， LOB基因是植物所特有的一个基因。但由于边界区细胞数量较少，表型不易 观察，因此对边界区形成的正反向遗传学研究都很困难，使得我们对边界区 形成的调控机理知之甚少。

茶叶对现代疾病如高血压、糖尿病、辐射病、心脏病、心血管病、帕金 森病、癌症和肥胖症等有一定的药理功效。茶多酚是茶树中主要的次生代谢 产物，儿茶素约占茶多酚总量的70％。儿茶素生物合成主要涉及的酶类有 PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F3H、F3’H、F3’5’H、DFR、LAR、ANS和 ANR等，已有研究结果表明，PAL、F3H、LAR和DFR的表达量随叶片成 熟度增加而逐渐下降：在新芽表达量最高，新叶次之，老叶最少。

研究发现拟南芥、甜橙、亚麻荠等植物的LOB基因均对植物地上部、 地下部的特定器官的形成与发育具有重要影响，但对茶树中相关LOB基因 的研究以及LOB基因与儿茶素合成的关系的研究还没有报道，因此对茶树 LOB基因的克隆及其他分子研究尤为重要。