[发明专利]基于二代测序技术的检测基因座的试剂盒及其专用引物组合

说明书

技术领域

本发明涉及法医学技术领域，具体涉及基于二代测序技术的检测基因座的试剂盒及其专用引物组合。

背景技术

DNA物证在现代法医学中扮演着越来越重要的角色，目前主要是利用毛细管电泳(capillary electrophoresis，CE)针对各STR基因座进行长度多态性方面的分型检测，但是在CE长度多态性分型系统下，核苷酸数量相等的所有等位基因被认为是同一个等位基因，容易导致一些杂合基因座中因等位基因序列不同但长度相同而被判别为纯合，而且由于毛细管电泳检测平台采用多色荧光复合扩增技术，为在各色荧光中安置更多的基因座，设计引物时需要为一些基因座保留较长的侧翼序列，导致其扩增效率降低，尤其不利于降解检材的分型。二代测序在法庭科学领域的应用尚处于起步阶段，但是随着办案过程中对于疑难生物样本检材比如降解样本检材分型的精确检测需求越来越高，需要利用二代测序技术(second generation sequencing，SGS)提供更为精确全面的检测结果。运用二代测序技术可针对生物样本微量检材，在一次测序实验中完成短串联重复序列多态性(short tandem repeat，STR)、单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)、插入缺失多态性(insertion/deletion polymorphism，Indel)、mRNA等各种类型的大量的遗传标记信息的检测。利用二代测序技术可精确分析各STR基因座等位基因间的序列差异，发现获取稀有型等位基因，得到各个基因座等位基因的序列信息也有利于辅助分析混合样本数据。对STR基因座进行分型时，由于检测对象是片段的序列多态性，各基因座片段长度可在小片段区域相互重叠且互不干扰，非常有利于降解检材的精确分型检测，这是目前毛细管电泳平台技术无法做到的。

目前，Illumina公司和Thermo Fisher公司已分别推出基于二代测序技术的STR分型试剂盒。以上试剂盒价格昂贵，且均不支持用户自主选择适合中国人群的STR基因座，配套的数据分析程序只能针对各自试剂盒中固有基因座的测序数据进行分析，具有一定的局限性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何进行STR分型。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了引物组合。

本发明所提供的引物组合，可由引物1、引物2、引物3、引物4、引物5、引物6、引物7、引物8、引物9、引物10、引物11、引物12、引物13、引物14、引物15、引物16、引物17、引物18、引物19、引物20、引物21和引物22组成；

所述引物1可为如下A1)或A2)：A1)序列表中的序列1所示的单链DNA分子；A2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物2可为如下A3)或A4)：A3)序列表中的序列2所示的单链DNA分子；A4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物3可为如下A5)或A6)：A5)序列表中的序列3所示的单链DNA分子；A6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物4可为如下A7)或A8)：A7)序列表中的序列4所示的单链DNA分子；A8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；

所述引物5可为如下A9)或A10)：A9)序列表中的序列5所示的单链DNA分子；A10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；

所述引物6可为如下A11)或A12)：A11)序列表中的序列6所示的单链DNA分子；A12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子；

所述引物7可为如下A13)或A14)：A13)序列表中的序列7所示的单链DNA分子；A14)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；

所述引物8可为如下A15)或A16)：A15)序列表中的序列8所示的单链DNA分子；A16)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；

所述引物9可为如下A17)或A18)：A17)序列表中的序列9所示的单链DNA分子；A18)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子；