[发明专利]定量检测人H-FABP的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种定量检测人H‑FABP的时间分辨荧光免疫层析试纸条，包括底板、以及依次设在所述底板上的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述结合垫上包被有荧光微球标记的H‑FABP单克隆检测抗体，所述包被膜包括平行设置、且相互间隔的检测区和对照区，所述检测区包被有H‑FABP单克隆捕获抗体，所述对照区包被有羊抗鼠IgG抗体，所述H‑FABP单克隆检测抗体对应具有如SEQ ID No:1～SEQ ID No:4任一所示氨基酸序列的抗原表位。本发明实现了H‑FABP的单人份定量检测，且灵敏度高，标记物稳定，抗干扰强，检测结果重复性好；操作简便，检测时间短，为临床使用提供了极大便利。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体地说，本发明涉及一种定量检测心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法。

背景技术

心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)是心脏中富含的一种新型小分子蛋白，和两个脂肪酸分子结合并参与脂肪的代谢，为心肌细胞提供能量，它具有高度心脏特异性，在心脏中H-FABP浓度比骨骼肌中高2-10倍，当心肌细胞受损时可快速释放到血液中，作为标志物诊断早期AMI的敏感性为77.4％，特异性为89.4％，并且H-FABP浓度能够估测心肌的受损面积。因此H-FABP可作为AMI的代表成为急性冠症候群(ACS)的早期诊断标志物。

H-FABP是一种心肌缺血的高敏早期标志物，缺血性发3分钟后即可检。和肌钙蛋白一起，可以促进疑似ACS患者的早期管理。脂肪酸结合蛋白(FABPs)在活性脂肪酸代谢的组织中大量存在，如心脏和肝脏，它们的主要功能促进细胞内的长链脂肪酸运输。现已确定九个不同类型的FABP，其中，H-FABP是最广泛的，因为它大量存在于心肌细胞。其低分子量和细胞质的位置相结合，使H–FABP成为急性冠脉综合症(尤其是胸痛发作6小时内)的一个高敏的早期标志物，缺血性发作30分钟后即可检测。这可能是因为在心肌缺血和心肌坏死以后，它迅速从细胞质进入血液循环。H-FABP在6-8小时左右达到浓度峰值，然后在24-30小时左右恢复至正常水平。如此迅速恢复至正常水平得益于高肾清除率，这意味着H-FABP不仅能够用作AMI早期标志物，还是理想的心肌梗死复发诊断标志物。尽管H-FABP的释放特点与肌红蛋白相似，但其心肌特异性是肌红蛋白的15-20倍；因此H-FABP是更有效的心肌损伤标志物。此外，H-FABP的正常血清/血浆值比肌红蛋白低，从而降低假阳性比率。

AMI发作后，H-FABP返回到基线浓度如此之快(通常20-24小时)，它也可以用作AMI复发的标志物。这点与CKMB一样，由于其比肌钙蛋白相比，有更快速的清除率(3-4天vs10-14天)。

H-FABP是在体外非常稳定的蛋白质，研究表明，血清和血浆样品可经受高达8次冷冻/解冻循环而没有免疫反应性的损失。

相较于单独使用肌钙蛋白的情况，使用H-FABP和肌钙蛋白的组合已证实，在症状出现后的早期(<4小时或<6小时)，可显著改善MI/ACS的诊断敏感性。关于预后，一些大型临床试验中肌钙蛋白阳性和肌钙蛋白阴性的患者分层长期ACS的风险已经说明了H-FABP的价值。即使在使用高度敏感的肌钙蛋白的情况下，诊断和预后也常增添H-FABP。除了ACS，H-FABP还用于其他范围，例如肺栓塞(PE)，冠状动脉搭桥手术(CABG)和脑血管疾病。

目前，心脏型脂肪酸结合蛋白H-FABP的测定主要采用双抗体夹心的免疫学方法，检测方法包括:

1、双抗夹心免疫化学发光法——该法操作简便，特异性强，敏感性高。

2、金标法——该法具有快速简便，易观察的特点，但是灵敏度不高。

3、透射免疫浊度法——该测定方法简便、快速，可自动化，适合于批量检测，但是免疫透射比浊的方法学及临床应用尚需做进一步的验证。