[发明专利]一种检测禽白细胞介素10含量的方法及其专用试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测禽白细胞介素10(IL-10)含量的方法及其专用试剂盒。

背景技术

1989年，Fiorentino等最先描述了白介素10是一种由2型辅助T细胞(Th2)分泌的、抑制Th1细胞中IL-2和IFN-γ合成的新的免疫介质。2004年，LisaRothwell等从感染艾美耳球虫的鸡盲肠扁桃体提取总RNA，经RT-PCR获得chIL-10的全长cDNA序列，其编码一条175个氨基酸的多肽，其中有21个氨基酸组成信号肽，成熟肽段长154个氨基酸。鸡IL-10与人IL-10和鼠IL-10的氨基酸序列同源性分别为45％和42％。鸡IL-10基因包含5个外显子和4个内含子。

树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞等细胞可以分泌IL-10，此外，TH1、TH2、TH17、Treg以及B细胞亚群也被证实可以分泌IL-10。IL-10能够抑制CD4+T细胞的增殖和细胞因子包括Th1型IL-2、IFN-γ和Th2型IL-4、IL-5的合成。IL-10抑制单核/巨噬细胞释放炎症介质，并因此抑制了LPS和IFN-γ诱导其分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、G-CSF和GM-CSF。此外，IL-10可以阻止B细胞凋亡，增强其增殖、分化和MHC II类分子的表达，而且在Ig类别转换中IL-4起着积极的作用。IL-10在调节免疫系统中发挥重要作用。

目前，已有在蛋白水平上检测人和小鼠IL-10的商品化试剂盒，但是由于chIL-10与人和小鼠IL-10的同源性仅分别为45％和42％，所以目前国内，无论是在学术研究还是临床疾病分析中主要还是以荧光定量PCR检测chIL-10的相对含量。但由于mRNA水平与蛋白水平并不呈绝对的线性关系，所以应用荧光定量PCR并不能反应出鸡IL-10蛋白的实际水平，故其并不能作为一个检测鸡IL-10蛋白量的实验技术而应用，同时荧光定量PCR技术操作繁琐，对专业技能要求较高且价格昂贵，不宜用于生产实际。

发明内容

本发明的第一个目的是提供抗chIL-10的单克隆抗体。

本发明提供的抗chIL-10的单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.13836的杂交瘤细胞株1G11和保藏号为CGMCC No.13837的杂交瘤细胞株1D6分泌的。将保藏号为CGMCC No.13836的杂交瘤细胞株1G11分泌的抗chIL-10的单克隆抗体命名为1G11抗体，将保藏号为CGMCC No.13837的杂交瘤细胞株1D6分泌的抗chIL-10的单克隆抗体命名为1D6抗体。

本发明的第二个目的是提供分泌抗chIL-10的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明提供的分泌抗chIL-10的单克隆抗体的杂交瘤细胞株为1G11和1D6。杂交瘤细胞株1G11的分类命名为杂交瘤细胞系(小鼠来源)，该杂交瘤细胞株已于2017年4月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.13836。

杂交瘤细胞株1D6的分类命名为杂交瘤细胞系(小鼠来源)，该杂交瘤细胞株已于2017年4月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.13837。

本发明的第三个目的是提供一种检测或辅助检测待测样品中chIL-10含量的酶联免疫试剂盒。

本发明提供的检测或辅助检测待测样品中chIL-10含量的酶联免疫试剂盒包括上述1G11抗体和/或1D6抗体。

上述酶联免疫试剂盒还包括chIL-10标准品；所述chIL-10标准品是通过将核苷酸序列如序列表中序列1所示的chIL-10基因在原核细胞中进行表达获得的。

所述酶联免疫试剂盒中还包括如下中的至少一种：酶标板、包被缓冲液、洗涤缓冲液、抗体稀释液、封闭液、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP标记的链霉亲和素)、显色液和终止液。

本发明的第四个目的是提供上述抗chIL-10的单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株或上述酶联免疫试剂盒的新用途。

本发明提供了上述抗chIL-10的单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株或上述酶联免疫试剂盒在检测或辅助检测待测样品中chIL-10含量中的应用。