[发明专利]一种在线快速筛选和定量中药中抗氧化活性成分的方法

说明书

本发明属于医药领域，具体涉及一种既能筛选又能定量中药中的抗氧化活性成分的ABTS⁺‑CE‑DAD方法。为了验证该方法的可行性，选择了舒血宁为例，筛选并确定了其中存在的9种抗氧化活性成分。实验过程中优化了缓冲液的pH值和磷酸盐浓度，十二烷基硫酸钠和β‑环糊精的浓度，乙腈的含量以及温度和电压等反应条件。在相同的条件下，ABTS⁺和舒血宁注射液样品先后进样，随后具有抗氧化活性的成分与ABTS⁺反应并被分离检测。同时，利用确定的条件也能对检测到的这几种抗氧化活性成分进行定量，并发现样品中这些活性成分的总含量与总的抗氧化活性有线性关系。方法学结果证明，本发明是可以应用于筛选中药中活性化合物的在线方法，且简便、可靠、低耗、环保以及易于自动化。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种既能筛选又能定量中药中的抗氧化活性成分的方法。

背景技术

近年来，科学家们越来越相信活性氧能够破坏细胞的主要结构尤其是脂类和DNA，然后引起细胞坏死，促进衰老甚至致癌。而抗氧化活性可清除氧自由基，从而抑制老年病，各种心脑血管疾病和神经退行性疾病，并且能预防癌症的发生，延缓衰老。天然产物，尤其是中药中已经被证明含有大量的抗氧化活性成分。因此，我们应该把中药作为寻找抗氧化物的重点资源。

银杏叶是一种具有抗氧化活性的中药，被广泛用于治疗各种老年病。以银杏叶提取物为主要原料制成的舒血宁注射液也同样具有抗氧化活性，因其几乎无副作用而常被用于治疗冠心病，心绞痛和脑血管痉挛等心血管疾病。考虑到用药的安全性，应该全面控制舒血宁注射液的质量。尽管已经有很多方法用于研究中药中的抗氧化活性成分，如LC(S.Lin,Studies on quality control of Shuxuening injections.TCM Univ.of FujianMaster's(2014))，LC-MS(J.Liang,A dynamic multiple reaction monitoring methodfor the multiple components quantification of complex traditional Chinesemedicine preparations:Niuhuang Shangqing pill as an example,J.Chromatogr.A,1294(2013)58-69)和GC-MS(Y.Hu,W.Kong,X.Yang,L.Xie,J.Wen,M.Yang,GC-MS combinedwith chemometric techniques for the quality control and originaldiscrimination of Curcumae longae rhizome:analysis of essential oils,J.Sep.Sci.37(2014)404-411)，但是分析舒血宁注射液的方法却很少。有人用LC-MS来研究舒血宁，但也只是测了其中各种活性成分的含量(J.Zaiyou,W.Wenquan,X.Guifang,M.Li,H.Junling,Comprehensive quality evaluation of Chishao by HPLC,Nutr Hosp.28(2013)1681-1687)。另一个存在的问题就是，现在已有的方法不能同时从药理活性和含量两方面综合地对舒血宁进行质量评价。Xiao-Ping Ding,Jin Qi和Yan-Xu Chang等人建立了一种在线HPLC-DAD-CL的方法结合抗氧化活性对银杏叶进行质量控制(X.P.Ding,Q.Jin,Y.X.Chang,L.L.Mu,D.N.Zhu,B.Y.Yu,P.S.Xie,T.A.Van Beek,Quality control offlavonoids in Ginkgo biloba leaves by high-performance liquid chromatographywith diode array detection and on-line radical scavenging activity detection,J.Chromatogr.A,1216(2009)2204-2210)。如果借鉴此方法来分析舒血宁注射液，会存在耗时长和有机溶剂消耗大等问题。