[发明专利]一种山苦瓜的组培快繁方法

说明书

本发明涉及种苗繁育技术领域，具体涉及一种山苦瓜的组培快繁方法。本发明采用组织培养的方法，通过不同外植体选取与处理、诱导、增殖、生根等过程，获得优质山苦瓜组培苗。使用本发明方法，可以明显促进植株生长、茁壮、提高继代次数，缓解玻璃化、黄化等问题，促进山苦瓜的开发、利用，满足其大规模生产和新优品种快速推广的需求。

技术领域：

本发明涉及种苗繁育技术领域，具体涉及一种山苦瓜的组培快繁方法。

背景技术：

山苦瓜(Momordica charantia var)又名土瓜、苦瓜莲，葫芦科山苦瓜属多年生宿根草质藤本，喜温怕寒。山苦瓜的根、茎、叶、花、果实和种子均可供药用，性寒味苦，入心脾胃三经，清暑解热，明目解毒。研究证实其果实中富含丰富的苦瓜甙、苦瓜素，能够明显降低血糖浓度，对健康非常有益，极具开发价值。

山苦瓜的繁殖方式常采用种子繁殖，繁育速度较慢，另外，其单果含种量仅有10余粒，难以在短期内获得大量种苗，严重制约了优良品种的推广速度。因此研究山苦瓜的离体快繁方法，进一步提高山苦瓜的开发、利用价值，对其大规模生产和新优品种的快速推广，具有重要的理论和现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种山苦瓜组培快繁的技术，它包括以下几个步骤：

1)外植体处理

山苦瓜的外植体选取主要以带腋芽的茎段为主，带腋芽茎段可以由无菌幼苗途径或大田实生苗途径获得。

①无菌幼苗途径：选取成熟饱满的种子，用50-55℃的温水搅拌20min后浸种6-8h对种子进行消毒处理。使用0.1％HgCl₂消毒10-15min,无菌水冲洗3-5次后，剥去种皮，胚根端朝下接种于MS培养基中培养，培养温度28-30℃；光照强度2000-3000Lux；连续光照培养10-12小时/天，7-10d后长出两片真叶且展叶后备用。

其中，0.1％的HgCl₂需提前4小时配制，保证充分溶解，配制时取1g HgCl₂粉剂溶于1L无菌水中，避光保存；HgCl₂粉剂采购于天津市致远化学试剂有限公司。

②大田实生苗途径：当年采收的种子播种后获得大田实生苗，选取生长25-45天的带腋芽的茎段作为外植体，剪成5-8cm小段，每段含有1-2个芽点，流水下冲洗10min-20min，再用0.1％HgCl₂处理7-8min，无菌水振荡冲洗3-5次,每次2-3min,消毒完成后备用；

2)腋芽诱导

将步骤1)所得的外植体切取3-5cm大小的茎段，确保每段含有1-2个腋芽，接入诱导培养基上,每30-50ml诱导培养基接种1-2个外植体，5-7天后即可诱导出腋芽。培养温度28-30℃；光照强度2000-3000Lux，连续光照时长10-12小时/天。

其中，改良基本培养基为：硝酸铵1650mg/L，硝酸钾1900mg/L，七水硫酸镁370mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，二水氯化钙440mg/L，宝力健0.5-1.0g/L，蔗糖20-30g/L，琼脂6.0-6.3g/L，用蒸馏水按常规方法配制培养基，用1mol/L的NaOH或HCl调节PH到5.8-6.2。

诱导培养基为每升改良基本培养基中加入0.5mg的6-BA和0.05mg的IBA组成

“宝力健”为一种新型有机微量元素添加剂，可以代替MS配方中的微量、有机、铁盐等，使效果更加突出，采购于北京康倍斯科技有限公司。

3)增殖培养