[发明专利]一种培养油茶无菌芽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物培养技术领域，尤其是涉及一种培养油茶无菌芽的方法。

背景技术

油茶是山茶科山茶属植物，又名油茶树、茶仔树，是我国南方特有的木本食用油料树种，利用栽培历史愈2300年。油茶和橄揽、油踪、挪子并称为世界四大木本食用油源树种，茶油不饱和脂肪酸含量达90以上，色佳味香，风味独特，营养丰富，耐胆藏，有降血压、血脂及软化血管的作用，对也血管疾病的预防有重要作用，是优质的食用油之一，被誉为“东方橄揽油”。同时，油茶副产物还是生产肥料、农药、拷胶的优质原料。油茶主要分布于我国秦岭、淮河以南，其中湖南、江西、广西、浙江、福建等为主产区，主要栽培的品种有小果油茶、漬山茶、攸县油茶、浙江红山茶、越南红茶等。据统计，我国油茶林栽培面积已达6000万亩，栽培规模巨大，但是部分地区经营管理粗放，导致油茶产业普遍存在着单位面积产量低和经济效益差两大问题。油茶低产低效的重要原因之一就是良种化程度低，品种混乱，大部分油茶林处于野生状态，产量较低，良种苗木短缺不能大面积推广种植。同时，油茶炭疽病是油茶的主要病害，在长江流域以南各省的大面积油茶栽培区，以及河南、陕西南部地区发生普遍。病害发生后，引起严重落果、落蕾、枝梢枯死，甚至整株衰亡，严重影响了油茶产业的健康发展。油茶林改良需要大量优质种苗供应，扦插嫁接育苗生产时间长、受场季节等限制，难Ｗ满足生产需要。通过植物组织培养技术建立高效稳定的油茶组培再生体系，进行油茶优良无性系繁育和品种遗传改良，具有重要的科研和生产价值。

现有技术如授权公告号为CN 102696480 B的中国发明专利，公开了一种试管内沙基质培养油茶无菌芽的方法，采用80～100目新鲜干净的河沙按1/4装入量装入试管，加入含0.01～0.02g/L抗坏血酸的MS液体培养基至湿润混匀作为培养基质，将1～5年生油茶龄植株树冠外围中上部带有腋芽的半木质化或刚木质化的嫩枝剪切成带腋芽1～2个、长3.0～4.0cm的小段，经消毒扦插至培养基质中培养，剪取新萌发的嫩芽转接至MS培养基中继续培养得到油茶无菌芽。该方法培养油茶无菌芽成功率高，经济效益好，但是培养周期长，短时间内很难提供大量油茶幼苗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无菌芽成功率高，培养周期短，实用性强的豆芽无土培养液。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种培养油茶无菌芽的方法，包括种仁准备、种仁消毒、培养基制备、种仁培养，具体步骤为：

种仁准备：选择优良油茶树上的饱满果实的种子，去掉种皮，挑选没有霉菌、虫蛀的种仁，用水冲洗干净，无菌水浸泡6-8h，备用，茶种子具有休眠性，去除了油茶坚硬的外种皮后浸泡能打破油茶种子的休眠，促进种子萌发，提高发芽率；

种仁消毒：将浸泡后的种仁先用70-80%的酒精消毒30-40s，无菌水冲洗4-6次，再用浓度为0.8-1.2%的HgCl₂消毒5-7min，无菌水冲洗，切掉胚乳的大部分，备用，该步骤是为了控制油茶种仁污染，获得充足的无菌材料，这是获得油茶无菌芽的关键，油茶种胚较小，切取种胚接种时要仔细观察，既要带有较少的胚乳又不能切坏种胚；

培养基制备：取重量份的庶糖28-32份、琼脂5-8份、细胞分裂素0.002-0.004份、吲哚-3-乙酸0.00005-0.00008份、赤霉素0.001-0.002份、抗菌肽0.002-0.003份、水1000-1100份，混合均匀，调节pH值为5-6，灭菌，即得培养基，抗菌肽的氨基酸序列为HSHACASYSRYHRGRCYCRCLRCRVLHPGKLCVCVNCSR，该抗菌肽具有广谱抗菌活性，对细菌有很强的杀伤作用，能够作用于细菌细胞膜，在膜上形成跨膜的离子通道，破坏了膜的完整性，造成细胞内容物泄漏，从而杀死细菌细胞，防止培养基被细菌感染，为培养无菌芽提供一个良好的生长环境，该培养基能为种仁的发芽提供充分的营养物质，缩短萌发时间，提高发芽率，能加快油茶种仁发芽速度和发芽整齐度，且能抑制细菌物质的产生，降低培养的污染率，使得培养油茶无菌芽成功率高；