[发明专利]一种免疫马用的免疫佐剂

说明书

技术领域

本发明涉及用基因工程技术领域，具体涉及一种免疫佐剂，尤其涉及一种免疫马用的免疫佐剂。

背景技术

抗破伤风免疫球蛋白是治疗破伤风感染时能用的唯一有特效的解毒药物。抗破伤风免疫球蛋白通常是用大型家畜免疫破伤风类毒素，待抗破伤风免疫抗体达到一定滴度时采取血浆提取抗体成份制备而成。当这些抗体注射入破伤风感染病人体内时，抗毒素可以很快中和相应的破伤风毒素。在破伤风感染治疗中，抗破伤风免疫球蛋白发挥了无可替代的作用。抗破伤风免疫球蛋白是治疗破伤风毒素中毒的最快速、最有效的药物。

抗蛇毒血清是治疗毒蛇咬伤时能用的唯一有特效的解毒药物。抗蛇毒血清通常是用大型家畜免疫相关的蛇毒，待蛇毒抗体达到一定滴度时采取血浆提取抗体成份制备而成。当这些抗蛇毒血清注射入被毒蛇咬伤病人体内时，抗血清可以很快中和相应的蛇毒。在蛇伤治疗中，马抗蛇毒血清发挥了无可替代的作用。马抗蛇毒血清是治疗蛇伤的最快速、最有效的药物。在我国每年有10万余人被毒蛇咬伤，临床上使用的抗蛇毒血清高达8万人份。

制备这些免疫球蛋白和抗血清每年需要上千万毫升高抗体滴度的马血浆，因此每年马匹的保有量达到数百匹。实际生产中，经常碰到免疫动物对抗原反应不一，有的马匹能产生高滴度的抗体；有些马匹对抗原刺激反应很弱，产生的中和抗体滴度很低甚至没有抗体，这部分马匹占整个免疫马群的30%左右。即使马匹能产生高效价的抗体，随着采血浆的次数增加，马匹体内的抗体滴度也会下降以致从这类马中采取的血浆无法用于抗毒素、抗血清的生产。这部分马匹无法用于生产，对产能影响很大。

免疫佐剂也称佐剂或抗原佐剂，是一类单独使用时一般无免疫原性，但是与抗原物质协同使用时能增强抗原物质免疫原性，增强机体免疫应答，或改变机体免疫应答反应类型的物质。

细胞因子(cytokine)是一类机体在免疫反应时产生的免疫调节物质。机体的免疫系统在受到抗原和各种免疫佐剂的刺激后，产生的应答性物质，这类物质统称为细胞因子。天然的细胞因子为哺乳动物产生的蛋白质，多数为分子量较小的单体（1x10⁴-2.5x10⁴），也有天然状态为二体或三体的。免疫反应通常是由多种细胞因子参与调节的。细胞因子对抗原递呈细胞(APC)的作用有增加APC的数量和活化APC的功能两个方面。

Interferon-alpha-1（干扰素α1）是一种增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用的细胞因子。Interferon-alpha-1可以明显提高机体的体液免疫机能。我们在使用马Interferon-alpha-1预防马病毒性传染病时发现一群对抗原免疫反应差的、反复多次抗原免疫后血清抗体滴度低的马匹，在注射Interferon-alpha-1后抗体效价明显提高，这个发现提示Interferon-alpha-1可以作为一种免疫佐剂以提高马匹抗血清的产量和质量。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种免疫马用的免疫佐剂。该免疫佐剂设计巧妙，应用方便，使用后可以较大幅度提高被免疫动物的抗体水平，具有很大的实用价值。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种免疫马用的免疫佐剂，含有马Interferon-alpha-1。

作为本发明优选的技术方案，所述的马Interferon-alpha-1采用基因工程重组表达方法制得，即重组马Interferon-alpha-1。所述的重组马Interferon-alpha-1是根据中国发明专利申请号201710147935.6的说明书中记载的方法制备，所述重组马Interferon-alpha-1的制备方法，包括如下步骤：

（1）将经过密码子优化的编码马Interferon-alpha-1的核苷酸序列构建入酵母细胞诱导表达载体中；

（2）转入酵母细胞进行培养后诱导表达；

（3）进行纯化，从而获得所述重组马Interferon-alpha-1。

较佳地，步骤（1）中，所述核苷酸序列是如SEQ ID NO:2所示的序列；步骤（2）中，所述酵母细胞是毕赤酵母细胞（即Pichia pastoris细胞），更佳地，所述毕赤酵母细胞（即Pichia pastoris细胞）是GS115细胞。

所述酵母细胞表达载体是毕赤酵母表达载体，载体转染入毕赤酵母细胞（Pichia pastoris细胞）后与酵母染色体重组整合入酵母染色体中。