[发明专利]半滑舌鳎GnIH基因、编码的两种成熟多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体地涉及半滑舌鳎促性腺激素抑制激素(GnIH)基因、编码两种成熟多肽及其应用。

背景技术

2000年，日本学者首次从鹌鹑(Coturnix japonica)脑中分离出的一种新型下丘脑十二肽，因其具有抑制垂体促性腺激素分泌的功能，故命名为促性腺激素抑制激素(GnIH)，这也是目前脊椎动物中唯一一种生殖抑制因子。随后，编码GnIH前体多肽的cDNA序列在鹌鹑及其他鸟类脑中被克隆出来。GnIH前体编码GnIH以及2个GnIH相关肽，它们C末端均为保守的Leu-Pro-X-Arg-Phe-NH2(LPXRF-a；X＝L或者Q)基序，因此GnIH及其相关肽也被称作LPXRFa多肽。2002年，鱼类GnIH同源基因首次在金鱼(Carassius auratus)脑中被鉴定出来。金鱼GnIH cDNA全长742bp，其中开放读框591bp，编码197个氨基酸的前体蛋白，经酶切加工可产生3种成熟肽(gfGnIH-1,-2和-3)。GnIH及其相关肽属于RFa多肽家族，该家族C末端为Arg-Phe-NH2(RFa)基序，RFa多肽家族均参与了脊椎动物生殖调控，介导了环境因子调控的生殖活动。目前，仅在金鱼等几种鱼类中鉴定出了GnIH基因，而且GnIH多肽在鱼类生殖调控中的作用研究很少，且存在争议。

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是一种重要的海水养殖经济鱼类，属鲽形目(Pleuronectiformes)、舌鳎科(Cynoglossidae)、舌鳎属(Cynoglossus)，其生长速度快，经济价值高，洄游距离短，是理想的增殖放流和人工养殖种类，近年来在全国沿海形成了较大规模的养殖产业。半滑舌鳎雌雄个体差异较大，雌性个体的平均体长约523mm，雄性个体的平均体长为280mm；雄性性早熟是导致半滑舌鳎雌雄生长差异的主要原因。GnIH作为目前脊椎动物中唯一一种生殖抑制因子，研究GnIH在半滑舌鳎垂体LH和GH分泌中的调控作用，这对研究半滑舌鳎性早熟现象的分子机理具有重要意义，也为研制新型生殖调控制剂提供理论依据。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供半滑舌鳎促性腺激素抑制激素基因、编码的两种成熟多肽及其应用。半滑舌鳎GnIH全长cDNA基因有918bp，开放阅读框有585bp，编码194个氨基酸前体肽。该前体肽经过剪接后形成两个具有功能的成熟多肽tsGnIH-1和tsGnIH-2，分别由43个氨基酸和19个氨基酸构成，两种成熟多肽对半滑舌鳎LH和GH分泌具有调控作用。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

半滑舌鳎促性腺激素抑制激素(GnIH)基因，序列为SEQ NO.1。

本发明还提供该基因编码的两种成熟多肽tsGnIH-1和tsGnIH-2，所述两种多肽的序列为SEQ NO.2和为SEQ NO.3。

本发明还提供上述两种成熟多肽在调控半滑舌鳎促黄体生成素(LH)与生长激素(GH)分泌中的应用。

本发明与现有技术相比的有益效果

半滑舌鳎具有重要的经济价值，采用常规的生物技术方法，可利用本发明的半滑舌鳎促性腺激素抑制激素(GnIH)基因和其编码的成熟多肽，研究半滑舌鳎性别分化和性早熟的分子生物学机理，具有重要的科学意义。

附图说明

图1是半滑舌鳎与金鱼、斑马鱼、河豚、欧洲海鲈、斜带石斑鱼、尼罗罗非鱼和青鳉的促性腺激素抑制激素cDNA编码的前体多肽序列比对。

图2是tsGnIH-1与tsGnIH-2对半滑舌鳎LH和GH分泌的调控作用。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1：半滑舌鳎GnIH全长cDNA序列克隆

本实施例的半滑舌鳎GnIH全长基因是以半滑舌鳎脑组织总RNA反转录得到的cDNA为模板，经PCR和RACE方法扩增而得到的，它来源于半滑舌鳎脑cDNA上的促性腺激素抑制激素GnIH结构域所对应的基因全长片段，序列如下：。