[发明专利]一种中性三七多糖的提取纯化方法及促进细胞增殖药理活性研究与应用

说明书

本发明涉及一种中性三七多糖的提取纯化方法及促进细胞增殖药理活性研究与应用，以生产中提取过的三七皂苷的三七废渣为原料，采用水提醇沉法，得到三七粗多糖，采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化三七粗多糖，得到5个组分：中性三七多糖PNPS I及酸性三七多糖PNPS II、PNPS III、PNPS IV、PNPS V 5个样品，研究其对人牙周膜干细胞和小鼠成骨细胞以及人皮肤表皮细胞体外增殖的影响，证明中性三七多糖PNPS I促进牙周膜干细胞和小鼠成骨细胞以及人皮肤表皮细胞增殖作用最明显，中性三七多糖PNPS I可作为开发新药的重要药物中间体，功能性保健食品的天然原料，而且还可作为日化产品的活性原料。

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种中性三七多糖的提取纯化方法及促进细胞增殖药理活性研究与应用。

背景技术

多糖广泛存在于动物、植物和微生物中。作为生命物质的组成成分之一，它广泛参与了细胞的各种生命现象及生理过程的调节，如免疫细胞间信息的传递与感受，细胞的转化、分裂及再生等活动。20世纪80年代以来，科学家们对中药多糖的研究产生了浓厚的兴趣。到目前为止报道的多糖有100多种，包括人参多糖、香菇多糖、灵芝多糖、黄芪多糖、茯苓多糖、虫草多糖、银耳多糖、刺五加多糖等，具有抗病毒、抗感染、抗肿瘤、抗氧化、抗辐射、降血糖、保肝、调节免疫等生理活性，且副作用小

三七为五加科人参属多年生草本植物，又名参三七、田七等，道地产地为云南文山。三七是我国珍贵的药材，其有效成分包括皂苷、三七素、黄酮、多糖、聚炔醇、氨基酸、脂肪酸和环肽类等。目前对三七有效成分的研究利用主要集中在皂苷成分，皂苷成分提取后，其他有效成分被当作废渣废液被弃去。

目前对三七的研究主要集中在皂苷类有效成分的利用和使用，对其他有效成分的研究不足。三七道地产地云南文山的三七常年种植面积达到了12万亩左右，产量9000吨。每年用于提取三七总皂苷的三七约为1400吨，研究表明，皂苷提取后，三七多糖在三七渣中，测定三七多糖在三七中的含量约为2％，每年弃去三七多糖近30吨。目前对三七多糖的研究报道主要集中在提高免疫功能研究。因此，分类开发能充分发挥三七多糖功效的产品是非常必要的。

专利申请号为201210058942.6的发明专利公开了一种具有生理活性的三七多糖的制备方法及其应用。该方法应用树脂柱层析、活性碳和膜分离技术纯化等步骤，精制纯化得到三七多糖。用该发明的制备方法得到的三七多糖具有蛋白质、重金属和灰分低，质量稳定的特点，并具有调节免疫、保护肝损伤、降低血糖、抗肿瘤等生理活性，可单独或组合作为天然药物和健康产品的原料，但是该发明并没有进行纯化，也没有揭露三七多糖在促进细胞增殖药理活性方面的作用。

专利申请号为201510407936.0的发明专利公开了一种白背三七多糖及其在制备用于免疫调节和抗肿瘤的药物和功能食品中的应用，该发明制得的白背三七多糖可促进单核巨噬细胞株吞噬中性红和释放一氧化氮；可以促进B细胞的增殖和T细胞的增殖；还可明显提高免疫抑制小鼠脾及胸腺指数、提高在T细胞和B细胞的转化增殖，提高免疫抑制小鼠白细胞水平；可明显抑制肿瘤组织的生长；而且还能够保护机体，抑制体重的下降，并增加体重；可明显抑制静脉内皮细胞的迁移。而且多糖是白背三七的主要功效成分，具有多种保健功效，来源属于纯天然，无副作用，可开发成免疫调节、抗肿瘤、抗血管生成药品和保健品，但是该专利并没有就三七多糖进行纯化，具体应用方面主要集中在提高免疫功能、抗肿瘤等。