[发明专利]玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡及其制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡及其制备方法。

【背景技术】

玉米赤霉烯酮(Zearalenone)，又称F-2毒素，是玉米赤霉菌的代谢产物。它首先从有赤霉病的玉米中分离得到，玉米赤霉烯酮其产毒菌主要是镰刀菌属(Fusarium)的菌侏，如禾谷镰刀菌(F.graminearum)和三线镰刀菌(F.tricinctum)。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物。其中玉米的阳性检出率为45％，最高含毒量可达到2909mg/kg；小麦的检出率为20％，含毒量为0.364～11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐热性较强，110℃下处理1h才被完全破坏。

玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，主要作用于生殖系统，可使家畜，家禽和实验小鼠产生雌性激素亢进症。妊娠期的动物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产、死胎和畸胎。食用含赤霉病麦面粉制作的各种面食也可引起中枢神经系统的中毒症状，如恶心、发冷、头痛、神智抑郁和共济失调等。

目前，玉米赤霉烯酮一般采用液相和气相色谱的方法进行测定。该测定方法具有检测周期长、操作复杂、灵敏度低、仪器设备昂贵等缺点，无法应用于大批量样品的筛查工作。

因此有必要提供一种新的技术解决上述技术问题。

【发明内容】

本发明的目的是克服上述技术问题，提供一种操作简单、灵敏度高、线性范围宽等优点的玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡。

本发明的技术方案是：

一种玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡，包括底板、设于所述底板且依次搭接的样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述玻璃纤维膜上涂布有由荧光微球标记的玉米赤霉烯酮单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上间隔设置有检测线和质控线，其中所述检测线由玉米赤霉烯酮偶联抗原包被于所述硝酸纤维素膜上形成，所述质控线由羊抗鼠IgG包被于所述硝酸纤维素膜上形成。

本发明还提供一种玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡的制备方法。包括如下步骤：

步骤S1：采用荧光微球对玉米赤霉烯酮单克隆抗体进行标记，并将其喷涂于玻璃纤维膜上；

步骤S2：将玉米赤霉烯酮偶联抗原包被于硝酸纤维素膜，形成检测线；将羊抗鼠IgG包被于硝酸纤维素膜，形成质控线；

步骤S3：在粘性底板上依次搭接样品垫、喷涂有由荧光微球标记的玉米赤霉烯酮单克隆抗体的玻璃纤维膜、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜及吸水垫，并裁切形成玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡。

优选的，步骤S1包括荧光微球活化、荧光微球标记抗体、标记抗体封闭、标记抗体喷涂于玻璃纤维膜步骤。

优选的，所述荧光微球与所述玉米赤霉烯酮单克隆抗体的质量比为10:1。

优选的，所述荧光微球的粒径为50-300nm。

优选的，所述标记抗体封闭步骤所用封闭液为浓度7.5％甘氨酸和10％牛血清白蛋白。

优选的，步骤S2中，所述羊抗鼠IgG的浓度为1mg/ml；所述玉米赤霉烯酮偶联抗原的浓度为2mg/ml。

优选的，所述检测线和所述质控线的间隔为5mm。

与相关技术相比，本发明提供的玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡及其制备方法，有益效果在于：

一、本发明提供的玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡为免疫层析检测卡，通过荧光微球标记玉米赤霉烯酮单克隆抗体，检测玉米赤霉烯酮的操作方便、检测速度快；所述玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡的线性范围为10-300μg/kg。

二、所述玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡的制备方法中，将荧光微球表面进行活化处理后，采用化学偶联方法来标记抗体，形成抗体与荧光微球的稳定结合，进一步保证检测结果精度。

【附图说明】

图1为本发明提供的玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡的结构示意图；

图2为本发明提供的玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡的标准曲线图。

【具体实施方式】

下面将结合附图和实施方式具体实施方式对本发明作进一步说明。

以下详细阐述所述玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡的制备方法。为方便描述，将在所述玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡的制备方法过程中应用到的部分试剂的简称说明如下，在具体描述其制备方法时对应的试剂采用简称。

2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，简称MES缓冲液；

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，简称EDC；

N-羟基琥珀酰亚胺，简称NHS；

4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液，简称HEPES缓冲液；