[发明专利]靶向血小板膜糖蛋白GPIbα的抑制肿瘤转移的单克隆抗体及其筛选方法

权利要求书

1.一种用于筛选靶向血小板膜糖蛋白GPIbα的肿瘤转移抑制剂的方法，其特征在于，所述的方法包括：

第一筛选模型，利用酶联免疫吸附技术初步筛选出靶向GPIb-IX复合物的样品；

第二筛选模型，利用免疫印迹法，在筛选所述的第一筛选模型的基础上进一步筛选出靶向GPIbα的样品；

第三筛选模型，利用连续光谱荧光仪测定样品对血小板与肿瘤细胞粘附作用的影响，筛选出对两者粘附具有抑制作用的抑制剂；

第四筛选模型，利用流式细胞术检测样品对肿瘤细胞诱导血小板活化的影响，以筛选出具有抑制作用的抑制剂；

第五筛选模型，利用流式细胞术检测血小板活性蛋白表达，以筛选出不影响血小板数量及功能的抑制剂，所述的第一筛选模型具体包括：

采用ELISA技术，依照双抗体夹心法原理，首先将靶向血小板膜糖蛋白GPIX的单克隆抗体吸附于酶标板上，加入微量血小板裂解液，使其抓取其中的GPIb-IX复合物，之后加入待筛选样品，使其中的靶向GPIb-IX复合物的样品结合，最后加入酶标记抗体后显色，最终通过酶标仪读取OD值，选取目标孔，即初步筛选出靶向GPIb-IX复合物的样品，所述的第二筛选模型，采用Western blot实验，通过最终条带位置确定待筛选样品与血小板裂解液的结合位置，筛选出靶向GPIbα的样品，所述的第三筛选模型中的肿瘤细胞为结肠癌细胞HCT116、乳腺癌细胞系MDA-MB-231及肺癌细胞系A549，并且所述的肿瘤细胞经缺氧24小时复氧2～4小时培养活化后与荧光染料标记的血小板共孵育，所述的第四筛选模型中的血小板活化检测包括对血小板活性蛋白P-selectin及PAC-1表达的检测，所述的第五筛选模型中的血小板活性蛋白为血小板活性蛋白P-selectin及PAC-1。