[发明专利]肿瘤抑制因子p16的抗原多肽和其应用

说明书

本发明公开了一种肿瘤抑制因子p16的抗原多肽和其应用。本发明肿瘤抑制因子p16的抗原多肽的多肽活性片段为下列至少一种氨基酸序列：(1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；(2)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经缺失、插入或替换所获得的具有相同功能的氨基酸序列。本发明抗原多肽可以在制备检测血样品中p16自身抗体水平的试剂盒中的应用。本发明抗原多肽具有的特定抗原决定簇，从而提高了本发明抗原多肽与待测样本中所含的肿瘤抑制因子p16的自身抗体之间的特异结合率，提高了检查的灵敏度高和检测效率，从而能够准确预测早期肿瘤的危险性，并为肿瘤新药研究提供可靠数据。

技术领域

本发明属于生物免疫学技术领域，是一种肿瘤抑制因子p16的抗原多肽和其应用以及和含有肿瘤抑制因子p16的抗原多肽的用于检测血样品中p16自身抗体水平的试剂盒。

背景技术

大量研究表明，血清或血浆中的肿瘤相关抗原能够诱导机体产生自身抗体，在恶性肿瘤恶变的前3-5年，患者血中可出现高浓度的肿瘤相关抗原自身抗体。这说明，既可以利用抗体检测肿瘤抗原，也可以利用肿瘤抗原检测自身抗体，但是利用肿瘤自身抗体检测肿瘤的特异性和敏感性均比利用肿瘤抗原检测肿瘤要高的多。原因是很多肿瘤相关抗原不仅在肿瘤患者体内存在，在正常人体内也存在，导致近年来的临床报道抗体检测方法敏感度低，特异性差，假阴性比率可高达50％以上。其主要原因是由于每一种肿瘤相关抗原自身抗体在患者中的阳性检测率平均在10％左右。因此，检测血中肿瘤相关抗原自身抗体具有预测肿瘤发病风险和早期诊断肿瘤的重要价值，是肿瘤临床诊断领域的重点发展方向之一。

在正常人体内自身抗体含量很低检测不到或根本不存在，若体内自身抗体水平明显增高，则表明体内存在异常免疫情况，表明体内相关抗原水平发生波动，预示疾病的存在或原有疾病加重。

P16为细胞周期依赖激酶(CDK)抑制蛋白的基因家族中发现的突变率最高的基因，又称多种肿瘤抑癌基因1(MTS1)。P16蛋白的功能是G1周期中与CyclinD1竞争性结合CDK4并特异性抑制CDK4阻止细胞尤其是带有损伤DNA的细胞进入S期，对细胞周期直接起反向调节作用，从而控制细胞分裂。当p16基因发生缺失、突变、转录和表达异常时，p16蛋白的合成障碍则引起细胞增殖的失控，使细胞无限制生长、分裂并向癌变转化。说明p16作为一种细胞周期调节蛋白，其表达异常和功能丧失都能引起肿瘤的恶性进展和不良预后。通过测定细胞中p16蛋白的含量可判断肿瘤的侵袭转移及估计患者的预后。

虽然自身抗体对肿瘤的诊断和预后是一种极有前途的生物标志物，对于肿瘤的早期诊断、改善患者预后和降低死亡率方面有重要的意义。但是，自身抗体作为肿瘤诊断标志物还存在很多问题：①检测阳性率低，②研究队列的样本量小，③敏感性不足，④检测成本较高。这些不足制约了自身抗体作为常用生物标志物的应用。

另外，目前以重组蛋白为抗原，要经过载体构建、转染、表达、筛选、纯化等繁琐的过程，蛋白空间结构复杂，抗原表位不易暴露，抗原抗体结合的特异性差。同时，ELISA法的高灵敏性对纯化技术的稳定性要求极高，成本昂贵。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种肿瘤抑制因子p16的抗原多肽和含有肿瘤抑制因子p16的抗原多肽的用于检测血样品中p16自身抗体水平的试剂盒，以解决现有将自身抗体作为肿瘤诊断标志物的方法存在的灵敏度和特异性不高，且成本高的不足。

为了实现上述发明目的，本发明一方面，提供了一种肿瘤抑制因子p16的抗原多肽。所述肿瘤抑制因子p16的抗原多肽的多肽活性片段为下列至少一种氨基酸序列：

(1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列：DWLATPAARDPVEEVR

(2)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经缺失、插入或替换所获得的具有相同功能的氨基酸序列。