[发明专利]藏猪IL-12重组质粒增强PCV2疫苗免疫佐剂的制备方法及应用

说明书

本发明公开了藏猪IL‑12及其重组质粒在制备PCV2疫苗免疫佐剂中的应用。本发明提供了本发明提供的一种蛋白质，由IL‑12蛋白P40亚基、2A、TPA和IL‑12蛋白P35亚基组成；所述2A的氨基酸序列为序列2第324‑344位；所述TPA的氨基酸序列为序列2第345‑369位。本实验用壳聚糖包裹IL‑12质粒制备壳聚糖纳米颗粒并与PCV疫苗同时接种实验动物，分别采用小鼠和猪作为实验动物，结果表明IL‑12真核转染质粒能有效增强PCV疫苗的免疫应答，为开发新型高效的PCV免疫佐剂提供了思路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体属于分子免疫学，涉及藏猪IL-12及其重组质粒在制备PCV2疫苗免疫佐剂中的应用。

背景技术

猪肉产品是城乡居民肉类消费的主要来源，与人们生活息息相关。21世纪以来，我国生猪的年存栏数和出栏数一直保持占世界总量的50％左右，居世界首位。我国养猪业取得举世瞩目成就的同时，还存在着许多制约我国养猪业健康发展的因素，其中疾病是最为主要的因素。目前，我国猪病诊断和防治水平与世界发达国家相比还存在着较大的差距，猪传染性疾病仍然十分严重，圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)感染是较为常见的一类传染病。PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemicwasting syndrome，PMWS)的主要病原，临床上常与猪高致病性繁殖与呼吸综合征、猪口蹄疫以及猪细小病毒病等混合感染、继发感染，给全世界养猪业造成了重大的经济损失。PCV2不仅是引起PMWS的病原体，而且还与猪皮炎与肾病综合征、肉芽肿性肠炎、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎及仔猪先天性震颤等疾病密切相关，这些与PCV2相关的疾病统称为猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease，PCVD)。

目前，防控PCVD的主要手段是接种疫苗，国内外学者在PCV2疫苗研究方便取得了显著成就，成功研制了包括PCV2灭活疫苗、PCV2弱毒疫苗、PCV2基因工程疫苗、PCV1-2嵌合疫苗以及PCV2标记疫苗等。但疫苗的使用存在一定的局限性，在我国PCV2全病毒灭活疫苗使用较为广泛，而其他疫苗使用较少。而PCV2灭活苗疫苗免疫猪群后，会出现猪采食量明显减少，偶有个别猪死亡等情况，为此，选择毒性小，免疫效果好的免疫佐剂是解决这一问题的不二途径。常用免疫佐剂有脂质体，壳聚糖等，但对细胞因子佐剂的研究较少。

细胞因子是一类由生物体自身的造血系统、免疫系统产生的活性多功能蛋白。目前发现的细胞因子有十几种，其中白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和干扰素(IFN-γ)这几种对动物极为重要。IL-12是IL-12细胞因子家族中的重要一员，是由p40和p35两个亚基组成的异致二聚体，能增强NK细胞的活性，诱导Th1细胞的分化，在许多炎症反应和免疫调解中都起着重要的作用。细胞因子由于其天然存在于生物体内，对免疫具有调节作用，近年来越来越受到关注，然而细胞因子在体内的半衰期短，时效短而成本高，因此，将细胞因子基因克隆进入质粒并转染至生物体内表达为解决这一问题提供了思路。

发明内容

本发明一个目的是提供藏猪IL-12。

本发明提供的一种蛋白质(命名为IL-12’)，由IL-12蛋白P40亚基、2A(自剪切连接肽)、TPA(信号肽，作用分泌信号)和IL-12蛋白P35亚基组成；

所述2A的氨基酸序列为序列2第324-344位；

所述TPA的氨基酸序列为序列2第345-369位。

上述蛋白质中，所述IL-12蛋白来源于藏猪；

或，所述蛋白质为如下(1)或(2)：

(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。