[发明专利]一种固相萃取‑液相色谱串联质谱法同时检测水体中9种雌激素类物质的方法

说明书

技术领域

本发明属于水环境中微量有机污染物质残留安全检测技术领域，涉及三种水环境中9种常规雌激素类物质的前处理方法和仪器检测分析技术，具体涉及一种固相萃取-液相色谱串联质谱法同时检测水体中9种雌激素类物质的方法。

技术背景

近些年来，环境内分泌干扰物(EDCs)已经引起人们的广泛关注，研究表明EDCs能够诱导雄鱼雌性化，影响水生生物机体的生长繁殖，会增加人类乳房癌的发病率。而天然和人工合成雌激素是最重要的EDCs，它们具有最强的内分泌干扰性，在纳克级水平就足以对水生生物造成不利影响。由人体和畜禽动物排泄产生的天然雌激素会经污水处理厂和畜禽动物养殖场排放进入水体环境，而人工合成雌激素作为激素类药物和动物饲料添加剂被使用从而进入水环境中，以及一些具有内分泌干扰效应的工业化学品在生产和使用过程释放到水环境当中。因此，水环境中雌激素污染不容忽视。

要对水环境中雌激素进行控制，雌激素的前处理方法和检测技术至关重要，因为它们是影响分析测定结果准确性的关键。随着人们对水环境中雌激素污染问题的日益重视，目前已有不少关于水环境雌激素检测方法的研究报道。例如，利用GC-MS方法检测雌激素具有良好的分辨度，但该方法具有局限性，它需要对物质进行衍生化处理才可分析测定，这无疑增加了处理难度和操作的复杂性。利用LC-MS/MS分析方法检测雌激素具有很多优势，如分析时间短，无需衍生化步骤，高灵敏度和低检出限等。这些方法的前处理方式大多以固相萃取为主，因为，它具有富集净化和降低基质效应的优势。但因水环境基质的多样性和复杂性以及分析物结构性质的差异，固相萃取的各个步骤参数的选择有所不同。另外，水样经过固相萃取富集的同时也会产生不同程度的损失，故对该前处理方法的优化成了当务之急。

随着人们对水质要求的提高，急需一种能够高效准确测定水环境中微量有机污染物质残留的分析方法。而固相萃取(SPE)结合高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)分析技术可以满足这一需求，它结合了HPLC的高效分离能力和MS/MS的强选择性和高灵敏度，具有应用范围广、分析速度快、分离能力强、灵敏度高和自动化程度高等特点，目前已成为微量乃至痕量有机污染物质分析检测的重要方法之一。但现有的固相萃取结合液相色谱-质谱法用于水环境中雌激素类物质的检测时，大多由于预处理不好，或固相萃取前处理条件、液相色谱条件和/或质谱条件选得不好，或多或少存在着检测结果不够准确、不稳定、干扰多、有机试剂消耗大、检测雌激素数量和范围有限等问题。

发明内容

本发明的目的旨在克服现有技术的缺陷，提供一种检测结果准确、稳定、干扰少，能同时测定水环境(自来水、河水、畜禽场污水)中9种常见雌激素类物质的方法，即一种固相萃取-液相色谱串联质谱法同时检测水体中9种雌激素类物质的方法。该方法采用固相萃取作为水环境样品的前处理技术，并利用高效液相色谱-串联质谱仪检测分析。该方法能够对水环境中雌酮(E1)、17α-雌二醇(17α-E2)、17β-雌二醇(17β-E2)、雌三醇(E3)、炔雌醇(EE2)、己烯雌酚(DES)、双酚A(BPA)、壬基酚(NP)和辛基酚(OP)这9种天然和人工合成雌激素的含量进行共检测，并且耗时少，有机溶剂消耗少，适用对象广，测定结果灵敏度高，准确度高，干扰少。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明一种能同时测定水环境(自来水、河水、畜禽场污水)中9种常见雌激素类物质的方法，即一种富集、净化、分离和同时检测水环境中9种雌激素类物质(雌酮、17α-雌二醇、17β雌二醇、雌三醇、炔雌醇、己烯雌酚、双酚A、壬基酚、辛基酚)的方法，该方法包括固相萃取富集净化条件的优化和高效液相色谱-串联质谱分析方法的优化。该方法采用单因素试验，以使9种雌激素类物质得到最大加标回收率为目标，对固相萃取小柱的种类、固相萃取pH值、淋洗剂种类和用量、洗脱剂种类和用量等进行优化；以使9种雌激素类物质在液相色谱中达到同步分离为指标，对液相色谱柱温、流速、进样量、流动量种类和梯度比例等进行优化，以得到出峰时间短、分离度好的离子流图。

本发明一种固相萃取-液相色谱串联质谱法同时检测水体中9种雌激素类物质的方法，按以下步骤实施：

(1)水样预处理

采集一定体积水样，过滤除去细小颗粒状悬浮物，加酸调节水样pH至3-4，固相萃取前加入内标物指示回收率。

(2)固相萃取(SPE)前处理：富集净化过程